1. 引言

蜡梅花始载于《救荒本草》，为蜡梅科植物蜡梅Chimonanthus praecox(L.) Link的干燥花蕾，收载于《卫生部药品标准中药材第一册》1992年版中[1]。蜡梅花的化学成分主要包括黄酮类、挥发油类化合物，具有解暑生津的功效[2]。常用于医治久咳、支气管炎等。现代研究提示蜡梅具有抗氧化、抗抑郁及保护受损器官等作用[3][4]。

梅花始载于《本草纲目》，为蔷薇科植物梅Prunus mume(Sieb.) Sieb. et Zucc.的干燥花蕾，主要含有黄酮类、挥发油、苯丙素类等化学成分[5]，收载于《中国药典》2020年一部，有着疏肝和中、化痰散结的功效[6]。现代研究表明具有抗氧化、抗抑郁、抗黑色素生成和抗血小板凝集的现代药理作用[7]。

蜡梅花与梅花在名称与性状上相似，多存在混淆使用的现象，它们具有不同的功效。目前的研究主要依靠性状和鉴别来区分这两种药材[8]，文中的薄层鉴别未使用对照品或对照药材作参照，无法判断样品与参照物之间的对应关系。中药特征图谱能高效鉴定药材真伪，准确评判药材的质量优劣[9]，具有良好的稳定性和均一性，已成为中药材鉴别的重要手段。本研究旨在通过HPLC特征图谱对蜡梅花与易混淆品梅花进行深入比较，为蜡梅花质量控制提供科学依据，确保其在中药临床应用中的安全和有效性。

2. 仪器与材料

2.1. 仪器

Waters H-Class型高效液相色谱仪(检测器：二极管阵列，美国Waters)；数控超声波清洗器(KH7200DE型；昆山禾创超声仪器有限公司)；Sartorius CPA225D型分析天平(德国赛多利斯)。

2.2. 材料

芦丁对照品(批号：100080-202012)、山柰酚对照品(批号：110861-202214)、槲皮素对照品(批号：100081-201610)均购自中国食品药品检定研究院。蜡梅花对照药材(批号：DSTYL009201)，购自成都德斯特生物技术有限公司。乙醇、磷酸为分析纯，甲醇为色谱纯，水为超纯水。15批蜡梅花、梅花药材由原河北省药品医疗器械检验研究院的孙宝惠老师鉴定，样品信息见表1。

Table 1.15 batches of medicinal material sample information

表1.15批药材样品信息

3. 方法与结果

3.1. 色谱条件

色谱柱：Waters CORTECS T3 2.1 mm × 100 mm，1.6 μm；流速：0.3 mL/min；柱温：35℃；检测波长：355 nm；流动相：甲醇(A)-0.2%磷酸溶液(B)，梯度洗脱(0~3 min，25% A；3~4 min，25% → 72% A；4~13 min，27% → 29% A；13~14 min，29% → 36% A；14~30 min，36% → 42% A)。

3.2. 对照品溶液的制备

精密称取芦丁对照品、槲皮素对照品、山柰酚对照品适量，加入甲醇制成每1 mL含芦丁80 μg、槲皮素50 μg、山柰酚20 μg的混合对照品溶液，作为对照品参照物溶液。

3.3. 供试品溶液的制备

取药材样品粉末(过三号筛)约0.5 g，加入70%乙醇50 ml，加热回流1小时后，放冷，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

3.4. 方法学考察

3.4.1. 精密度试验

取药材样品(S1)，依照“3.3”项下的方法制备成供试品溶液，并且按“3.1”项下的色谱条件连续进样6次，同时记录色谱图结果，以芦丁对照品作为参照峰，计算蜡梅花6个共有峰的相对保留时间和相对峰面积的RSD均小于3%，说明了仪器精密度良好。

3.4.2. 重复性试验

取药材供试品(S1)，依照“3.3”项下方法制备成供试品溶液，并且按“3.1”项下的色谱条件制备供试品溶液6份，同时记录色谱图结果，以芦丁对照品作为参照峰，计算蜡梅花6个共有峰的相对保留时间和相对峰面积的RSD均小于3%，说明了该方法重复性良好。

3.4.3. 稳定性试验

取药材样品(S1)，依照“3.3”项下的方法制备成供品溶液，并且按“3.1”项下的色谱条件，分别于0 h、2 h、6 h、8 h、10 h、12 h、18 h、24 h进样检测，记录色谱图结果，以芦丁对照品作为参照峰，计算蜡梅花6个共有峰的相对保留时间及相对峰面积的RSD均小于3%，说明了供试品溶液在24小时内稳定性良好。

3.5. 特征图谱分析与评价

3.5.1. 特征图谱的建立

精密吸取“3.2”项下的各对照品溶液，并且按“3.1”项下的色谱条件进样检测，记录各对照品色谱图。

将蜡梅花对照药材依照“3.3”项下方法制备成对蜡梅花照药材溶液，并且按“3.1”项下的色谱条件进样检测，得到了蜡梅花对照药材色谱图。

将10批蜡梅花药材特征图谱数据导入“中药色谱指纹图谱相似度评价系统(2012年版)”中，选择S11蜡梅花对照药材的色谱图作为参照图谱，用平均数法作为对照图谱生成方式，时间窗宽度设为0.1 min，多点校正，在Mark峰匹配模式下生成6个共有峰，并生成对照图谱R，见图1。

Figure 1.10 batches of Flos Chimonanthi characteristic chromatograms

图1.10批蜡梅花特征图谱

梅花色谱峰呈现4个与蜡梅花共有的特征峰，将5批梅花药材导入“中药色谱指纹图谱相似度评价系统(2012版)”中，选择S1梅花药材的色谱图作为参照图谱，见图2。将10批蜡梅花药材与5批梅花药材同时导入“中药色谱指纹图谱相似度评价系统(2012版)”中，选择S11蜡梅花对照药材的色谱图作为参照图谱，见图3。

Figure 2.5 batches of Mume Flos characteristic chromatograms

图2.5批梅花特征图谱

Figure 3.Overlay diagram of 15 batches of samples

图3.15批样品叠加图

根据对照品指认，蜡梅花特征图谱中的峰3、峰5、峰6分别是芦丁、槲皮素、山柰酚。见图4。可观察到，在保留时间27~30 min内，蜡梅花特征图谱中峰6与山柰酚对照品参照物峰的保留时间相对应，而梅花特征图谱中未出现山柰酚；此外，蜡梅花在保留时间为11.0~14.0分钟范围内显示出两个主要色谱峰，而梅花则显示出4个色谱峰。

Figure 4.Characteristic chromatograms of Flos Chimonanthi, Mume Flos and Reference substance

图4.对照品、蜡梅花、梅花特征图谱

3.5.2. 相似度评价

将10批蜡梅花药材和5批梅花药材特征图谱分别导入“中药色谱指纹图谱相似度评价系统(2012年版)”中，并分别计算两类样品色谱图与参照图谱的相似度，蜡梅花参照图谱为S11蜡梅花对照药材，梅花参照图谱为S12梅花对照药材，计算结果见表2和表3。据相似度测定结果可见，10批蜡梅花药材相似度均大于0.90，5批梅花药材相似度均大于0.90两种药材品种内的相似度均大于0.90。

Table 2.Evaluation results of similarity between 10 batches of Flos Chimonanthi and Flos Chimonanthi control medicinal materials

表2.10批蜡梅花与蜡梅花对照药材相似度评价结果

Table 3.Evaluation results of similarity between 5 batches of Mume Flos and Mume Flos No.12

表3.5批梅花与梅花药材12相似度评价结果

将10批蜡梅花药材和5批梅花药材特征图谱同时导入“中药色谱指纹图谱相似度评价系统(2012年版)”中，参照图谱为S11蜡梅花对照药材，计算结果见表4。据相似度测定结果可知，10批蜡梅花药材相似度均大于0.90，5批梅花药材相似度均小于0.60，两种药材品种之间的相似度差异较大。

Table 4.Evaluation results of similarity between 10 batches of Flos Chimonanthi and 5 batches of Mume Flos and Flos Chimonanthi as control medicinal materials

表4.10批蜡梅花和5批梅花与蜡梅花对照药材相似度评价结果

关于梅花与蜡梅花中山柰酚的差异，通过调研文献两种药材化学成分的差异，夏玮[10]、曾冬明[11]、马雪梅[12]等报道，均从蜡梅花中鉴定出了山柰酚等黄酮类化合物；钟春琳[13]等建立了药材特征图谱，指认了芦丁、槲皮素和山柰酚特征峰。而张清华[14]、严辉、王灿灿[15]等多篇研究，从梅花中分离得到的黄酮类化合物，均未提及山柰酚的存在。建议继续对蜡梅花与梅花药材中的有效化学成分进行研究，例如种属之间的差异、采收时间等影响因素的研究，为保障药品安全有效提供有力支撑。

4. 讨论

本研究成功建立了蜡梅花(Flos Chimonanthi)的HPLC特征图谱，并详细分析了蜡梅花及其易混淆品梅花(Mume Flos)之间的显著化学成分差异，研究结果显示，蜡梅花的色谱图显示出6个特征峰，而梅花的色谱图谱则呈现了4个与蜡梅花共有的特征峰，特别是，蜡梅花特征图谱中峰6与山柰酚对照品参照物峰的保留时间相对应，进一步确认了山柰酚的存在，而梅花的特征图谱中未检测到山柰酚的存在；此外，蜡梅花在保留时间为11.0~14.0分钟范围内显示出两个主要色谱峰，而梅花则显示出4个色谱峰。通过对15批样品的HPLC特征图谱与对照药材图谱的比对分析，本研究成功将样品分为两类：10批蜡梅花样品的相似度均大于0.90，5批梅花样品的相似度均小于0.60。两种药材品种内的相似度均大于0.90，品种之间的相似度差异较大。

基于特征图谱、对照药材比对和相似度分析的结果，本研究能够客观、准确地鉴别蜡梅花药材的真伪，为其质量控制提供了科学依据。研究所建立的特征图谱评价方法简便易行、稳定、重复性均较好，为进一步提高蜡梅花的质量提供了科学依据。

基金项目

云南省配方颗粒重点实验室(202105AG070014)；云南省重大科技专项计划(202102AA310027)；石家庄市中药配方颗粒产业技术研究院(228790779A)。

NOTES

^*通讯作者。

参考文献