1. 案例资料

1.1. 简要案情

2017年06月11日4时许，陈某驾驶小型轿车至某市公交车站路段时，与行人李某相撞，造成交通事故。事故发生后，陈某驾车逃逸。

1.2. 样本

1号检材：李某口腔拭子一份。

2号检材：车辆前挡风玻璃碎屑处提取的可疑生物检材一份(胶带粘取)。

3号检材：车辆前挡风玻璃碎屑处提取的可疑生物检材一份(棉线擦拭转移)。

1.3. 方法

1.3.1. DAN的提取

1号检材采用Chelex-100法提取DNA；2号与3号检材采用QIAamp^® DNA Investigator Kit(50)试剂盒(德国QIAGEN公司)提取DNA。

1.3.2. 扩增与分型

采用PowerPlex^® 21试剂盒(美国Promega公司)进行复合扩增，反应体系10 μL，模板DNA1μL，同时设立灭菌纯水为阴性对照样本，2800 M为阳性对照样本。采用AB3130xL自动遗传分析仪(美国AB公司)，对PCR复合扩增产物进行分析，用AB的GeneMapperID-X1.5软件进行数据处理。

1.4. 结果

上述3份检材用PowerPlex^® 21试剂盒进行PCR复合扩增时，阴性对照未检出特异性扩增产物，阳性对照基因分型正确，3份检材均得到特异性扩增产物。上述3份检材的STR分型图谱见图1、图2和图3；3份检材21个STR基因座分型结果的数据统计分析见表1。

分析上述二十一个STR基因座的检测结果，1号检材的基因分型和2号、3号检材的基因分型完全一致，计算1号检材与2号、3号检材在上述20个常染色体STR基因座的累积随机匹配概率(CPM)为9.3403 × 10⁻³³，似然率(LR)为1.0706 × 1032。对DNA检测结果的分析表明：从可疑车辆前挡风玻璃碎屑上提取的微量检材为李某所留。

2. 讨论

通过勘察事故现场，我们从嫌疑肇事车辆上，可以发现和提取到诸如毛发、体液、分泌物、人体组织等常规生物检材，进行DNA检验，以解决肇事车辆认定问题。然而有时，在事故车辆碰撞处，虽然与人体有接触，但是可能找不到肉眼可见的诸如血液、毛发等常规生物检材。如本案中在受撞击的车前挡风玻璃上，未发现明显的生物检材。我们分别用粘取法和擦拭法提取了该车辆前挡风玻璃碎屑表面的可

疑微量检材，用特异性的DNA纯化试剂盒结合Chelex-100法处理提取DNA，并进行复合扩增，成功获得了STR分型，与李某的口腔拭子样本DNA比对，最终解决了肇事车辆认定问题。

在交通事故中。嫌疑车辆的挡风玻璃、保险杠、汽车轮胎花纹内可能存在着肉眼无法发现的微量生物检材，此类检材由于体积小、微量、不易被识别等特点，往往易被现场勘察人员忽略。因此我们在勘察事故现场时，尤其要重视一些较为关键的重点部位，不能忽略微量检材的提取。在微量检材中含有人体脱落细胞。人体脱落细胞多为角质上皮细胞，细胞核多已退化，但也有尚未完全角化就已经脱落的细胞，从这些细胞中有可能获得未完全降解的核DNA。所以，脱落细胞的富集和DNA提取，是获取完整STR分型图谱的关键 [1] [2] [3] 。根据脱落细胞的载体性质的不同，可以分为渗透性载体(如衣物、鞋帽等纺织类)和非渗透性载体(如门把手等钢制金属类)。针对不同类型的载体，所采用的脱落细胞的富集方法也不同。有文献记载，针对渗透性载体，使用直接剪取法获得的DNA检测量较高；针对非渗透性载体，胶带粘取法和真空吸附法获得的DNA检测量较高 [4] 。在本案中，受撞击的车前挡风玻璃就属于非渗透性载体，我们采用胶带粘取法和擦拭转移均成功富集到了脱落细胞 [5] 。另外，从可疑肇事车辆上提取的生物检材，往往容易沾有灰尘、泥土等杂质。为了去除污染物及抑制剂对后续PCR扩增的影响，仅仅采用经典的Chelex-100法进行DNA的抽提是不够的，我们必须采用专业的纯化试剂盒提取DNA，以实现PCR的有效扩增 [6] 。在本案中，我们采用QIAamp^® DNA Investigator Kit(50)试剂盒，对现场提取的两份微量生物检材都进行了DNA纯化与浓缩，有效提高了微量生物检材的利用率，最终成功获得了STR分型。

脱落细胞的DNA检测成功率普遍不高。如何提高DNA的检出率，使之更好地得到应用，细致的现场勘验收集检材、正确适当的脱落细胞富集、优良的DNA提取方法、稳定的PCR系统的选择以及正确的结果分析均是关键。如何在脱落细胞的检材的检验过程中防止污染也是至关重要的。所以在提取的过程中，一是要注意防止污染；二是要尽量少处理和触摸所擦拭的区域；三是分区域进行检材的提取和检测。脱落细胞大多通过接触转移而遗留在现场载体上，对检验出的结果要正确认识，要考虑到所有接触到该载体的个体，都有可能将细胞遗留在载体上。所以要结合现场勘查、调查走访及案件资料等，对脱落细胞的分型结果进行综合判断，最终确定检材为罪犯遗留的可能性。

参考文献

[1] Alessandrini, F., Cecati, M., Pesaresi, M., et al. (2003) Fingerprints as Evidence for a Genetic Profile: Morphological Study on Fingerprints and Analysis of Exogenous and Individual Factors Affecting DNA Typing. Journal of Forensic Sciences, 48, 586-592. https://doi.org/10.1520/JFS2002260

[2] van Oorschot, R.A. and Jones, M.K. (1997) DNA Fingerprints from Fingerprints. Nature, 387, 767-787. https://doi.org/10.1038/42838

[3] Danielb, Q. (2012) Cell Free DNA as a Component of Forensic Evidence Recovered from Touched Surfaces. Forensic Science International: Genetics, 6, 26-30. https://doi.org/10.1016/j.fsigen.2011.01.004

[4] 董会, 王晶, 李彩霞, 等. 不同载体上微量接触类检材的相关问题研究[J]. 生命科学研究, 2015, 19(2): 145-153.

[5] 董会, 魏丽, 张涛, 等. 微量接触类生物检材的游离DNA问题分析[J]. 分子影像学杂志, 2015, 38(3): 177-181.

[6] 刘亚举, 张俊涛. 纯化PCR产物检出微量生物检材STR分型1例[J]. 河南科技大学学报科技版(医学版), 2016, 34(2): 141-142.

参考文献