1. 引言
在交通事故中，人体与车体碰撞损伤过程中会在事故车辆上遗留有毛发、血痕、人体组织及玷污物等一类关键的法医物证检材，因此如何发现及利用事故现场嫌疑车辆上遗留的这些物证检材，进行比对检验和鉴定，对于处理肇事车辆的认定问题具有重要的意义。下面就以本鉴定所的典型案例来说明，如何应用DNA检测技术，实现交通事故肇事车辆的认定。
2. 简要案情
2014年02月，某县公路上发生一起撞伤行人致死的交通事故。当地交警从可疑肇事车辆的发动机盖上以及车底盘处，发现血痕及可疑组织。
3. 样本
1号检材：尸体血样1份；
2号检材：可疑肇事车辆发动机盖上的血痕1份；
3号检材：可疑肇事车辆底盘处的可疑组织1份。
4. 方法
4.1. DAN的提取
直接剪取可疑肇事车辆发动机盖上血痕的棉签擦拭提取物，常规Chelex-100提取；对车辆底盘的可疑组织和尸体血样，加5% Chelex-100 140 μl，10 mg/ml蛋白酶K4 μl；56℃水浴消化过夜，次日取出后，剧烈震荡5~10 s，置入加热模块上100℃变性10 min，13000 r/min室温下离心10 min后取上清备用。
4.2. 扩增与分型
以上提取物按照AmplFSTR®SinofilerTM试剂盒说明(美国AB公司)进行复合扩增，反应体系10 μL，模板DNA1μL，同时设立灭菌纯水为阴性对照样本，9947A为阳性对照样本。采用AB 3130xL自动遗传分析仪(美国AB公司)，对PCR复合扩增产物进行分析，用AB的GeneMapper IDv3.2软件进行数据处理。
5. 结果
上述检材用AmplFSTR®SinofilerTM试剂盒(美国AB公司)进行PCR复合扩增时，阴性对照未检出特异性扩增产物，阳性对照基因分型正确，3份检材均检出特异性扩增产物。上述3份检材的STR分型图谱见图1、图2和图3；3份检材的16个STR基因座分型结果的数据统计分析见表1。
Table 1. 3 samples STR loci typing results
表1. 3份检材STR基因座分型结果
Figure 1. 1 samples of STR typing map
图1. 1号检材的STR分型图谱
Figure 2. 2 samples of STR typing map
图2. 2号检材的STR分型图谱
Figure 3. 3 samples of STR typing map
图3. 3号检材的STR分型图谱
分析上述16个STR基因座的检测结果，1号检材(尸体血样)的基因分型与2号检材(可疑肇事车辆发动机盖上的血痕)和3号检材(可疑肇事车辆底盘处的可疑组织)的基因分型完全一致，计算1号检材与2号、3号检材在上述15个常染色体STR基因座的累积随机匹配概率(CPM)为9.0271 × 10−33，似然率(LR)为1.8283 × 1020。对DNA检测结果的分析表明：支持从可疑车辆上提取的血痕及可疑组织为死者所留。
6. 讨论
当交通事故发生时，人体与车体碰撞损伤过程中会在事故车辆上诸如轮胎花纹里，挡泥板，挡风玻璃以及保险杠等处遗留有人体组织、毛发、血痕等生物检材 [1] 。有时候，肇事车辆会逃逸，驶离事故现场。可疑的肇事车辆在扣回之前，可能已经行驶过一段时间，生物检材很可能会被日晒雨淋或粘附有泥土等杂质。这些情况会使现场勘察人员难以发现潜在的生物物证 [2] 。因此，如何从可疑的肇事车辆上提取到有用的生物检材，显得尤为关键。
我们在现场提取检材时须注意以下几点：①结合现场勘察的结果，对案件进行重建，分析可能发生的碰撞部分，对这些重点部位进行细致勘察 [3] 。尤其不能忽略一些较为关键的隐蔽处，如车辆发动机盖，底盘，挡泥板，挡风玻璃以及保险杠等；②从可疑车辆提取的生物检材如血痕、组织、毛发等，易被灰尘，道路上的杂质等污染，为以去除污染物及抑制剂对后续PCR扩增的影响，仅仅采用经典的Chelex-100法进行DNA的抽提是不够的，我们必须采用专业的纯化试剂盒提取DNA，以实现PCR的有效扩增。
NOTES
*通讯作者。