1. 引言

黄鳍金枪鱼(Thunnus albacares)，又名黄鳍鲔、黄肌金枪，是一种重要的经济鱼类，属于鲈形目鲭科金枪鱼属[1] [2]。它们体型纺锤形，稍侧扁，尾柄细长，背鳍和臀鳍呈黄色，尾鳍新月形[3] [4]。黄鳍金枪鱼主要分布在太平洋、印度洋和大西洋的热带和亚热带海域，中国的南海和台湾附近海域也有分布[5]。黄鳍金枪鱼是暖水性中上层鱼类[6]，通常栖息在水深50~200米处[7]。它们对盐度变化敏感，喜欢在盐度较高的水域活动。黄鳍金枪鱼是肉食性鱼类，主要以小型鱼类、鱿鱼和大型甲壳类为食[8]。在繁殖方面，黄鳍金枪鱼属于分批产卵类型，怀卵量在200万到800万粒之间[9]。它们的受精卵在水温26摄氏度时，经过24~36小时即可孵化[10]。黄鳍金枪鱼的生长速度较快，幼鱼阶段尤为明显[11]。由于其肉质鲜美，黄鳍金枪鱼在全球市场上需求量很大，常用于制作生鱼片和罐头食品。然而，过度捕捞已导致其资源面临威胁，目前被列为近危物种。

近年来，对于黄鳍金枪鱼的研究取得了显著进展。中国水产科学研究院南海水产研究所成功进行了黄鳍金枪鱼的人工催产研究，首次在我国外海养殖区获得了高孵化率的受精卵。这标志着我国在黄鳍金枪鱼繁育技术上的重要突破。南海水产研究所还在野生黄鳍金枪鱼幼鱼的驯化养殖方面取得了新进展，初步构建了外海采捕、海上运输、海–陆转运和室内循环水驯化养殖技术体系[12]-[14]。全球范围内，黄鳍金枪鱼的生物学和渔业研究也在不断深入[15]。研究涵盖了黄鳍金枪鱼的分布、洄游、种群结构、生长、繁殖及食性等基本生物学特性[16]。这些研究为黄鳍金枪鱼的资源管理和保护提供了科学依据[17]。研究人员已初步掌握了黄鳍金枪鱼在人工环境中的养殖生物学特征，并构建了基于深水网箱和循环水系统的投喂管理模式[14]。这些研究成果不仅提高了黄鳍金枪鱼的繁育和养殖效率，还为其大规模养殖提供了技术支持。

盐度变化对鱼类的影响是一个复杂而多方面的问题[18]。盐度是影响鱼类生理活动的重要环境因素，盐度变化会引起鱼体内一系列生理和生化反应[19]。首先，鱼类通过调节体内外渗透压来适应不同的盐度环境，盐度升高时需要排出多余的盐分[20]。其次，盐度变化会影响鱼类的抗氧化酶活性[21]，例如总抗氧化能力(T-AOC)和过氧化氢酶(CAT)等。此外，盐度变化还会影响鱼类的生长和代谢，不同种类的鱼类对盐度变化的耐受性不同[22]。最后，盐度变化也会影响鱼类的行为和迁移模式，鱼类会根据盐度变化调整其栖息地和迁移路径[23]。本实验通过研究急性低盐胁迫对黄鳍金枪鱼幼鱼抗氧化能力的检测，揭示黄鳍金枪鱼幼鱼在急性低盐环境下的生理和生化相应机制。通过测定抗氧化酶活性(如总抗氧化酶T-AOC和过氧化氢酶CAT)、氧化应激指标(脂质过氧化物LPO)和氧化还原指标(乳酸脱氢酶LDH)，可以了解鱼类如何通过增强抗氧化能力来应对低盐胁迫。在鱼类抗氧化过程中，鱼鳃不仅负责呼吸，还参与代谢和排毒过程，保护细胞免受损伤[24]；肝脏作为代谢器官，负责合成和分泌抗氧化酶，参与解毒和代谢脂质，通过调节能量代谢和抗氧化物质的生产[25]；肌肉通过储存和释放抗氧化物质发挥作用[26]，肌肉在代谢活动中产生的能量和热量也有助于维持细胞的正常功能，从而支持整体抗氧化能力[27] [28]。此类组织能够中和自由基[29]，可以帮助清除体内的自由基[30]，深入探讨有助于理解鱼类如何应对环境压力。

研究盐度变化对黄鳍金枪鱼幼鱼抗氧化作用有助于理解其在急性低盐环境下的适应机制，帮助优化养殖环境，提高鱼类的存活率和生长速度。了解黄鳍金枪鱼幼鱼在低盐环境下的抗氧化响应，可以帮助优化养殖环境，提高其存活率和生长速度。总之，研究盐度变化对黄鳍金枪鱼幼鱼的抗氧化作用，不仅有助于揭示黄鳍金枪鱼幼鱼的生理适应机制，还为水产养殖和生态保护提供了科学指导。

2. 材料与方法

2.1. 试验材料

黄鳍金枪鱼幼鱼由中国水产科学研究院南海水产研究所热带水产研究开发中心陵水试验基地提供，将72尾黄鳍金枪鱼幼鱼体长(28.97 ± 2.17) cm，体质量(646.52 ± 66.32) g，随机放入6个装有循环过滤海水系统的5000 L玻璃钢水箱中，进行为期7天的驯化。每天从08:30到09:00投喂新鲜杂鱼块(4厘米 × 2厘米)，每天投喂量为体重的5%~8%。实验前一天和实验期间不投喂饲料。实验装置分为玻璃水箱、供水箱、过滤池、循环水控制系统和氧气泵。为了保持水温、盐度，通过电气控制系统进行光照控制和自动换水。在实验过程中，每个玻璃水箱都供应过滤海水，换水量为水箱日容量的300%。每个试验重复三次，34‰为对照组，29‰为实验组。

2.2. 试验方法

实验组的盐度以1‰的速度逐步调整，方法是在通气24小时的自来水中加入天然过滤的海水。当胁迫组的水盐度达到29‰时，实验开始。实验时间为48小时，每个实验缸为12条黄鳍金枪鱼幼鱼。光照时间保持在14:10小时(光照：黑暗)。使用HQ40d多参数仪(HQ40d18, Hach, Loveland, CO, USA)监测盐度、水温、溶解氧和pH值，使用中国生物技术(哲成生物技术，北京，中国)监测NaNO₂和NH₃-N。实验期间水温保持在29.5 ± 0.5℃，DO > 7.50 mg·L⁻¹，pH 7.93 ± 0.12，NaNO₂ < 0.1 mg·L⁻¹和NH₃-N < 0.05 mg·L⁻¹。

在实验的0、6、24、48 h，从实验组和对照组随机收集三条黄鳍金枪鱼幼鱼收集样本，进行消化酶活性测定。使用10 mg·L⁻¹丁香油对鱼进行麻醉，然后在冰盘上解剖。迅速取出鳃、肝肌肉组织样本，用预冷生理盐水冲洗并在滤纸上吸干，放入冷冻离心管中，−80℃保存。检测前取出部分样本，在0~4℃冰箱中解冻，称取0.1~0.2克组织样本，加入9倍体积的预冷生理盐水，用玻璃匀浆器在冰上用0.2 M NaCl匀浆，离心(0~4℃，2500 r-min-1，10分钟)。将上清液置于酶底物中孵育，用分光光度计(Synergy H1, BioTek Instruments, Winooski, VT, USA)读取消化酶活性。所有抗氧化指标均使用参考试剂盒(中国南京建成生物工程研究所，中国)的说明书进行指标测定，测得吸光值后按照说明书计算相应酶活力值，每项数据均采用一式三份法。

2.3. 测定方法

使用蛋白质定量试剂盒(目录编号：A045-4，中国南京生产)，以牛血清蛋白为标准，采用托马斯亮蓝法测定蛋白质含量。采用微孔板比色法，在562 nm波长下，于37℃孵育30分钟，依据吸光度与浓度成正比，通过测吸光度即可计算待测蛋白的浓度。黄鳍金枪鱼幼鱼的脂质过氧化物(LPO)试剂盒(货号：A106-1，中国南京建成生物工程研究所)，脂质过氧化物(LPO)在45℃反应60分钟的条件下，一分子脂质过氧化物(LPO)，和两分子的显色试剂反应，产生一种稳定的生色团，在586 nm下有最大吸收峰。通过公式计算可得到检测物中脂质过氧化物(LPO)的含量。黄鳍金枪鱼幼鱼的总抗氧化能力(T-AOC)试剂盒(货号：A105-2，中国南京建成生物工程研究所)，使用ABTS工作液，ABTS在适当的氧化剂作用下氧化成绿色的ABTS⁺，在抗氧化物存在时，ABTS⁺的产生会被抑制，在405 nm或734 nm测定ABTS⁺的吸光度即可测定并计算出样品的总抗氧化能力。Trolox是一种VE的类似物，具有和VE相近的抗氧化能力，用作其它抗氧化物总抗氧化能力的参考。例如，Trolox的总抗氧化能力为1，相同浓度情况下，其它物质的抗氧化能力用其抗氧化能力和Trolox相比的倍数来表示；在采用Trolox作为标准品进行总抗氧化能力检测时，样品的抗氧化能力可以用Trolox-Equivalent Anyioxidant Capacity (TEAC)来表示；对于细胞或动植物组织样本，液体与某个摩尔浓度Trolox的抑制率相同，计算时用该浓度下Trolox的摩尔浓度另外除以匀浆液的蛋白浓度，最后以mmol·g⁻¹蛋白来表示。黄鳍金枪鱼幼鱼的乳酸脱氢酶(LDH)试剂盒(货号：A020-2-2，中国南京建成生物工程研究所)，主要基于乳酸脱氢酶催化乳酸和丙酮酸之间的相互转化，这一过程涉及到辅酶I (NAD⁺)的参与，在递氢作用下，乳酸脱氢酶将乳酸脱氢生成丙酮酸，同时NAD⁺被还原成NADH，37℃温浴反应15 min后加入2,4-二硝基苯肼，它与丙酮酸反应生成丙酮酸二硝基苯腙，在碱性环境中显棕红色，混匀后，37℃温浴反应15 min，加入0.4 mol/LNaOH溶液，室温放置5 min后，使用酶标仪在450 nm波长测定其吸光度值，通过比尔定律，可测定乳酸脱氢酶(LDH)活性，活性单位定义为样本中每克蛋白对应的酶量在37℃与基质作用15分钟，使反应体系中产生1 µmol丙酮酸为1单位(U∙gprot⁻¹)。黄鳍金枪鱼幼鱼的过氧化氢酶(CAT)试剂盒(货号：A007-1-1，中国南京建成生物工程研究所)，过氧化氢酶(Catalase)分解H₂O₂的反应可通过加入钼酸铵而迅速中止，剩余的H₂O₂与钼酸铵作用产生一种淡黄色的络合物，在405 nm处测定其变化量，可计算出CAT的活力，活性单位定义为样本中每毫克蛋白对应的CAT每秒钟分解1 µmol的H₂O₂为一个活力单位(U∙mgprot⁻¹)。

2.4. 数据处理

实验数据利用Excel办公软件进行整理，使用SPSS 26.0统计软件对所有数据进行统计分析，并使用独立样本T检验进行分析对照组和实验组之间酶活性的差异。若存在显著差异，当P < 0.05时，认为差异显著；当P > 0.05时，认为差异不显著。使用Origin软件绘制曲线图。数据结果以均数 ± 标准差(mean ± SD)表示。

3. 结果

3.1. 急性低盐胁迫对黄鳍金枪鱼幼鱼脂质过氧化物酶(LPO)含量的变化

Figure 1. Effect of acute low salt stress on lipid peroxidase content (LPO) of juvenile Thunnus albacares: (a) Gill tissue enzyme activity; (b) Liver tissue enzyme activity; (c) Red muscle tissue enzyme activity; (d) White muscle tissue enzyme activity

图1. 急性低盐胁迫对黄鳍金枪鱼幼鱼脂质过氧化物酶含量(LPO)的影响：(a) 鳃组织酶活性；(b) 肝组织酶活性；(c) 红肌组织酶活性；(d) 白肌组织酶活性

急性低盐胁迫实验期间，实验组黄鳍金枪鱼幼鱼鳃、肝组织中，脂质过氧化物酶含量呈先升后降的趋势，于24 h快速上升达到峰值9.93 ± 0.75 umol∙gprot⁻¹ (图1(a))、4.47 ± 0.34 umol∙gprot⁻¹ (图1(b))并显著高于对照组(P < 0.05)；红肌、白肌脂质过氧化物酶含量各个实验组差异不显著(P > 0.05)，且与对照组差异不显著(P > 0.05) (图1)。

3.2. 急性低盐胁迫对黄鳍金枪鱼幼鱼总抗氧化物(T-AOC)能力的变化

Figure 2. Effect of acute low salt stress on total antioxidant capacity (T-AOC) of juvenile Thunnus albacares: (a) Gill tissue enzyme activity; (b) Liver tissue enzyme activity; (c) Red muscle tissue enzyme activity; (d) White muscle tissue enzyme activity

图2. 急性低盐胁迫对黄鳍金枪鱼幼鱼总抗氧化物能力(T-AOC)的影响：(a) 鳃组织酶活性；(b) 肝组织酶活性；(c) 红肌组织酶活性；(d) 白肌组织酶活性

急性低盐胁迫实验期间，实验组黄鳍金枪鱼幼鱼鳃组织中，总抗氧化物能力24 h显著升高(0.90 ± 0.01 mmol∙g⁻¹)且显著高于对照组(P < 0.05)；肝脏组织中，总抗氧化物能力24 h显著降低至谷值(0.85 ± 0.01 mmol∙g⁻¹)且显著低于对照组(P < 0.05)；红肌与白肌T-AOC能力均呈先升后降趋势，且在48 h恢复至对照组水平(P < 0.05)而在整个实验期间显著高于对照组(P < 0.05) (图2)。

3.3. 急性低盐胁迫对黄鳍金枪鱼幼鱼乳酸脱氢酶(LDH)活力的变化

Figure 3. Effect of acute low salt stress on lactate dehydrogenase activity (LDH) of juvenile Thunnus albacares: (a) Gill tissue enzyme activity; (b) Liver tissue enzyme activity; (c) Red muscle tissue enzyme activity; (d) White muscle tissue enzyme activity

图3. 急性低盐胁迫对黄鳍金枪鱼幼鱼乳酸脱氢酶活性(LDH)的影响：(a) 鳃组织酶活性；(b) 肝组织酶活性；(c) 红肌组织酶活性；(d) 白肌组织酶活性

急性低盐胁迫实验期间，在黄鳍金枪鱼幼鱼鳃组织中，乳酸脱氢酶活性实验组、对照组各时间点无显著差异性(P > 0.05)；肝脏组织实验组中，在6 h显著降低且达到谷值(5.45 ± 0.70 U∙gprot⁻¹)，且6~48 h显著低于对照组(P < 0.05)；红肌与白肌组织实验中，均在24 h平均酶活性降到最低，分别为241.88 ± 15.47 U∙gprot⁻¹和108.80 ± 2.79 U∙gprot⁻¹，实验组酶活性显著低于对照组(P < 0.05)，随后在48 h恢复至对照组水平(P > 0.05) (图3)。

3.4. 急性低盐胁迫对黄鳍金枪鱼幼鱼过氧化氢酶(CAT)活力的变化

Figure 4. Effect of acute low salt stress on lactate dehydrogenase activity (LDH) of juvenile Thunnus albacares: (a) Gill tissue enzyme activity; (b) Liver tissue enzyme activity; (c) Red muscle tissue enzyme activity; (d) White muscle tissue enzyme activity

图4. 急性低盐胁迫对黄鳍金枪鱼幼鱼总抗氧化物的影响：(a) 鳃组织酶活性；(b) 肝组织酶活性；(c) 红肌组织酶活性；(d) 白肌组织酶活性

急性低盐胁迫实验期间，实验组黄鳍金枪鱼幼鱼鳃组织中，过氧化氢酶活性呈先上升后下降的趋势，盐度骤变显著提高过氧化氢酶在鳃中的活力，在6 h达到峰值11.09 ± 0.08 U∙mgprot⁻¹，后恢复至对照组水平(P > 0.05)；肝脏组织中，过氧化氢酶活力呈上升趋势直至实验结束，且显著高于对照组(P < 0.05)；红肌与白肌组织实验中，呈下降上升趋势，且均在6 h达到谷值，分别为4.81 ± 0.39 U∙mgprot⁻¹、2.54 ± 0.70 U∙mgprot⁻¹，但红肌组织中实验组酶活力显著低于对照组(P < 0.05)，且在48 h时恢复至对照组水平(P > 0.05)，白肌组织各时间点无显著差异(P > 0.05) (图4)。

4. 讨论

脂质过氧化物酶(LPO)在抗氧化过程中具有重要作用[31]。尽管主要参与脂质的氧化代谢，但其产生的某些代谢产物，如脂氧素，具有抗氧化特性，可以通过调节炎症反应和细胞信号传导来减轻氧化损伤[32]。脂质过氧化物酶通过催化多不饱和脂肪酸的氧化反应，生成生物活性分子[33]，这些分子不仅有助于局部免疫调节，还能促进抗氧化酶的表达，从而增强细胞的抗氧化能力[34]。在面对氧化应激时，脂质过氧化物的调控可以帮助清除自由基，保护细胞膜的完整性，减缓细胞损伤[35] [36]。脂质过氧化物被证实是一种细胞损伤机理，作为细胞和组织中氧化应激的一种指标[37]。脂质过氧化物是不稳定的，其可分解形成一系列复杂的混合物，包括反应的羰基混合物[38]。本实验对脂质过氧化物酶的结果显示，48 h内会对鳃、肝组织影响较大，肌肉组织影响不明显，李莉珍[39]等人评估了盐度胁迫对大黄鱼肝脏的影响。实验7 d后，他们发现各盐度组间，机体受到的氧化损伤程度呈加重趋势。鱼类的LPO活性对盐度变化的反应与物种有关。同一种鱼的不同组织中抗氧化酶的活性也不同[40]。肝脏是集代谢、免疫、消化等功能于一体的多功能器官[41]。肝脏是氧化反应较多的组织，因此抗氧化酶的活性较高[42]。

鱼类的总抗氧化物(T-AOC)包括多种抗氧化酶和非酶抗氧化物质，抗氧化物质能够捕捉并中和自由基[43]，防止它们对细胞膜、蛋白质和DNA的损伤，通过减少体内的氧化应激水平，保护细胞膜免受氧化损伤[44]，抗氧化物质帮助维持细胞的正常功能[45] [46]。总抗氧化能力的高低可以反映鱼类对抗氧化应激的防御能力，抗氧化能力越强，鱼类越能抵御自由基的损伤，从而保持健康和良好的生长状态[47] [48]。本实验对总抗氧化物的结果显示，急性低盐胁迫后，鳃、肌肉组织中总抗氧化物显著升高，证明黄鳍金枪鱼幼鱼对抗氧化应激的防御能力升高，来抵御自由基的损伤，且能在48 h内适应应激环境。T-AOC是机体各类抗氧化分子及酶促反应体系抗氧化能力的总和，通常T-AOC升高时，鱼体清除活性氧分子的能力会增强[49]。凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei) [50]的总抗氧化能力随盐度的升高总体呈上升趋势，且逐渐上升，与本研究不同，48 h后总抗氧化能力基本保持稳定，表明机体可以快速调动并稳定适应。

鱼类的乳酸脱氢酶(LDH)在抗氧化过程中起着重要作用[51]。乳酸脱氢酶是糖酵解过程中的关键酶，能够将乳酸转化为丙酮酸，同时生成[52] [53]。在抗氧化方面，乳酸脱氢酶活性增加可以帮助细胞更有效地进行糖酵解，提供更多的能量以应对氧化应激[54] [55]。这些功能使得乳酸脱氢酶在鱼类的抗氧化防御系统中扮演了重要角色，帮助鱼类抵御环境压力和氧化损伤[56] [57]。本实验对乳酸脱氢酶的结果显示，在鳃组织中基本趋于稳定，急性低盐对肝脏、肌肉组织影响更为明显，具有组织的特异性。GHANAVATINASAB等[58]研究发现黄鳍棘鲷的鳃组织在不同盐度下抗氧化酶活性没有显著变化。孙雪娜[59]研究发现同一盐度下，金线鱼肝脏抗氧化系统相关指标显著高于鳃和肌肉组织。与已有研究存在一定差异，这可能与鱼种不同有关。

鱼类的过氧化氢酶(CAT)在抗氧化过程中起着关键作用。过氧化氢酶能够催化过氧化氢(H₂O₂)的分解，生成水和氧气，从而减少过氧化氢对细胞的氧化损伤[60]。具体来说，过氧化氢是一种具有高度活性的物质，可以攻击蛋白质和DNA等细胞成分，导致细胞损伤[61] [62]。过氧化氢酶可以帮助维持细胞的正常功能和稳态[63]。这些使得过氧化氢酶在鱼类的抗氧化防御系统中扮演了重要角色，帮助鱼类抵御环境压力和氧化损伤，保持健康和良好的生长状态[64] [65]。本实验对过氧化氢酶的结果显示，过氧化氢酶活性在鳃组织中活性较低，急性低盐影响其活力，胁迫过程中肌肉组织中活性先降低后升高，最后趋于稳定。大口黑鲈(Micropterus salmoides)幼鱼[66] CAT在肝脏中活性较高，CAT活性随盐度的升高没有表现出显著降低的趋势；大黄鱼(Larimichthys crocea) [67]经过低盐胁迫活性显著增加，均与本研究相似。尹飞等[68]研究结果表明，适当降低水体盐度可以激活和增强银鲳(Pampus argenteus)幼鱼肝脏抗氧化酶活性以消除机体中过多的活性氧自由基。与本研究相似，在急性低盐条件下，不同时间点之间黄鳍金枪鱼幼鱼所有组织的CAT活性都有显著影响，但所有盐度组的CAT活性在48 h后基本趋于稳定，说明黄鳍金枪鱼幼鱼已慢慢适应环境，并具有较强的调节能力。

5. 结论

急性低盐环境对黄鳍金枪鱼幼鱼的影响，特别是在鳃、肝和肌肉组织的抗氧化能力方面，是一个复杂而重要的研究课题。此研究表明，不同组织(鳃、肝、肌肉)对急性低盐的响应存在差异，鳃的抗氧化系统可能主要针对气体交换和离子调节功能，而肝脏则可能通过代谢调节来应对氧化压力，肌肉则更多地关注维持能量代谢和结构完整性。急性低盐会影响抗氧化酶的表达和活性。在低盐环境中，鱼类可能通过增强抗氧化酶活性来应对氧化压力，但这种响应的有效性可能因组织类型而异。鳃组织可能受到较大影响，尤其是氧化应激和脂质过氧化物，肌肉组织在乳酸脱氢酶和总抗氧化物中影响较大，但都可以在短时间内可恢复至正常水平，使黄鳍金枪鱼幼鱼适应低盐水体。综上所述，这些变化不仅关乎鱼类的生存和健康，也对其养殖和食品安全具有重要意义。进一步的研究需要结合具体的实验数据，以深入了解这些影响的机理和后果。

基金项目

中国水产科学研究院中央级公益性科研院所基本科研业务费专项资金资助(2024XT04，2023TD58)；中央引导地方科技发展资金项目(桂科ZY22096005)；广西科技基地和人才专项(桂科AD21238026)；海南省科技专项资助(ZDYF2024XDNY247)；中国水产科学研究院中央级公益性科研院所基本科研业务费专项资金资助(2024XT04，2023TD58)；广东省现代化海洋牧场适养品种核心技术攻关项目(2024-MRB-00-001)。

NOTES

^*通讯作者。

参考文献