1. 引言
续断(Dipsacus asper Wall.),又名和尚头,为川续断科川续断的干燥根,多年生草本植物,因能“续折接骨”而得名。其味苦、辛,性微温,归肝、肾经,能够补肝肾、强筋骨、续折伤、止崩漏。在续断中发现的如三萜皂苷类、环烯醚萜苷类、生物碱类及挥发油等有效成分[1],在筋伤骨折、跌扑损伤、肝肾不足、腰膝酸软、风湿痹痛、崩漏、胎漏等病症中发挥着要作用[2][3]。现代药理研究证明续断对哮喘[4]、骨质疏松[5]、痴呆[6]等症都具有良好的治疗效果。
随着社会的发展和科技的进步,传统的以煎、煮药物的提取方式已不适用于现代化的发展,服药不便、质量标准不易掌控、搬运储存困难等缺点严重影响了中药的发展[7][8][9]。而中药配方颗粒是通过结合现代科技的手段,将单味的传统中药饮片,经现代制药技术提取、精制、浓缩、干燥、制粒、包装等工艺制备后得到的纯中药干燥微小颗粒。有着可直接冲服、作用迅速、疗效确切、安全卫生、携带保存方便、易于调制和适合工业化生产等优点,已然成为目前中医临床和医疗机构使用的主流产品之一[10][11][12]。
近年来,中药配方颗粒的市场迅速扩大,其质量问题也受到越来越多的关注。中药配方颗粒存在的质量标准不统一、生产工艺水平参差不齐、国家监管难度大等问题难以解决[13][14]。然而,常规的一些鉴别手段难以进行识别,中药材进行加工过程中,外貌和性状特征产生改变,以次充好、伪品药材掺杂等情况,导致配方颗粒质量参差不齐,临床疗效不能得到有效保证,不利于控制产品质量[15][16]。而中药指纹图谱作为一种综合、可量化的色谱鉴定手段,能够客观反映药物中化学成分群的整体信息,较好地体现出成分的复杂性和相关性,广泛用于评价药材、饮片、制剂的质量[17][18][19]。
因此,本研究通过UPLC技术对续断及其配方颗粒进行分析,建立续断及配方颗粒的UPLC指纹图谱,建立完善可行的质量评价方法,为确保续断及其配方颗粒的一致性评价及质量控制提供理论依据。
2. 材料与仪器
2.1. 仪器
ACQUITY UPLC (美国Waters公司,包括四元高压梯度泵、自动进样器、柱温箱、PDA检测器、Empower色谱工作站);AL204-IC/万分之一分析天平(METTLE RTOLEDO仪器有限公司);KQ-100E型超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司),《中药色谱指纹图谱相似度评价系统》(国家药典委员会2012A版)。
2.2. 试剂
甲醇,乙腈为色谱纯(默克股份两合公司,德国),磷酸分析纯(国药集团化学试剂有限公司),水为哇哈哈纯净水。续断药材与配方颗粒来源见表1。
Table 1.Sources ofDipsacus asperW. medicinal materials and formula granules
表1.续断药材及配方颗粒的来源
编号 |
类型 |
批号 |
编号 |
类型 |
来源 |
S1 |
药材 |
J2017080701-01 |
S11 |
配方颗粒 |
广东一方制药有限公司 |
S2 |
药材 |
J2017070603-01 |
S12 |
配方颗粒 |
广东一方制药有限公司 |
S3 |
药材 |
J2017070601-03 |
S13 |
配方颗粒 |
广东一方制药有限公司 |
S4 |
药材 |
J2017030102-01 |
S14 |
配方颗粒 |
广东一方制药有限公司 |
S5 |
药材 |
J2017070602-01 |
S15 |
配方颗粒 |
广东一方制药有限公司 |
S6 |
药材 |
J2017010203-01 |
S16 |
配方颗粒 |
广东一方制药有限公司 |
S7 |
药材 |
J2016110303-01 |
S17 |
配方颗粒 |
广东一方制药有限公司 |
S8 |
药材 |
J2016110401-01 |
S18 |
配方颗粒 |
广东一方制药有限公司 |
S9 |
药材 |
J2016110503-01 |
S19 |
配方颗粒 |
广东一方制药有限公司 |
S10 |
药材 |
J2016110501-01 |
S20 |
配方颗粒 |
广东一方制药有限公司 |
3. 方法和结果
3.1. 色谱条件
色谱柱为Agilent ZORBAX Eclipse Plus C18(2.1 mm × 100 mm, 1.8 μm);流速0.2 mL∙min−1;检测波长212 nm;柱温30℃;进样量1 μL;流动相:0.1%磷酸水(A)-乙腈(C),梯度洗脱程序见下表2。
Table 2.Chromatographic Conditions
表2.色谱条件
时间(t) |
流动相A |
流动相C |
0~4 |
95~90 |
5~10 |
4~15 |
90~74 |
10~26 |
15~25 |
74~63 |
26~37 |
25~30 |
63~53 |
37~47 |
3.2. 供试品溶液制备
取10批续断药材,粉碎,过4号筛,各取约1.0 g,精密称定,置具塞锥形瓶中,加甲醇25 mL,称定质量,超声提取(功率250 W,频率35 k Hz) 30 min,放冷,再称定质量,用甲醇补足减失的质量,摇匀、过滤,取续滤液过0.22微孔滤膜,即得续断药材供试品溶液;取10批续断配方颗粒,研细,各取约1.0 g,精密称定,置具塞锥形瓶中,按药材供试品溶液制备方法,制备续断配方颗粒供试品溶液。
3.3. 方法学考察
3.3.1. 精密度实验
取同一批次续断药材样品,按“溶液的制备”项下制备供试品溶液,按“液相指纹图谱的色谱条件”项下色谱方法连续进样6次,并记录各共有峰的保留时间和峰面积,计算各共有峰的相对保留时间和相对峰面积的RSD均小于3.0%,表明仪器精密度良好。
3.3.2. 稳定性考察
取同一批次续断药材样品,按“溶液的制备”项下制备供试品溶液,按“液相指纹图谱的色谱条件”项下色谱方法分别于0、2、4、8、12和24 h进样测定,并记录各共有峰的保留时间和峰面积,计算各共有峰的相对保留时间和相对峰面积的RSD均小于3.0%,表明样品溶液在24 h内稳定。
3.3.3. 重复性考察
取同一批次续断药材样品6份,按“溶液的制备”项下制备6份供试品溶液,按“液相指纹图谱的色谱条件”项下色谱方法分别进样,并记录各共有峰的保留时间和峰面积,计算各共有峰的相对保留时间和相对峰面积的RSD均小于3.0%,表明该方法重复性良好。
3.4. 特征峰的测定
液相指纹图谱的建立
按确定的方法制备分析样品,按确定的色谱条件分别对10批续断药材、10批续断配方颗粒进行测定,得到各批次样品UPLC色谱图,分别导入中药指纹图谱相似度评价系统(2012A),得到续断药材、续断配方颗粒、续断药材及配方颗粒色谱指纹图谱及对照色谱指纹图谱(图1~6)。
Figure 1.UPLC Fingerprint ofDipsacus asperW.
图1.续断药材UPLC指纹图谱
Figure 2.Fingerprint ofDipsacus asperW. reference material
图2.续断药材对照指纹图谱
Figure 3.UPLC fingerprint ofDipsacus asperW. formula granules
图3.续断配方颗粒UPLC指纹图谱
Figure 4.Fingerprint ofDipsacus asperW. formula granules control
图4.续断配方颗粒对照指纹图谱
Figure 5.UPLC fingerprint ofDipsacus asperW. and formula granules
图5.续断药材及配方颗粒UPLC指纹图谱
Figure 6.Fingerprint ofDipsacus asperW. and formula granules comparison
图6.续断药材与配方颗粒对照指纹图谱
3.5. 共有峰的确立
以0.1%磷酸水和乙腈进行梯度洗脱,峰形较好,分离效果理想,建立的续断药材及其配方颗粒的指纹图谱中,10批续断药材确定25个共有色谱峰,10批续断配方颗粒确定32个共有色谱峰,10批续断药材与10批配方颗粒确定25个共有峰。以5号峰为药材和配方颗粒的参照峰,计算各共有峰的相对保留时间与相对峰面积,见表3,表4。
Table 3.Relative retention time of common peaks in the fingerprint spectrum ofDipsacus asperW. and formula granules
表3.续断药材及其配方颗粒指纹图谱共有峰的相对保留时间
共有峰 |
S1 |
S2 |
S3 |
S4 |
S5 |
S6 |
S7 |
S8 |
S9 |
S10 |
S11 |
S12 |
S13 |
S14 |
S15 |
S16 |
S17 |
S18 |
S19 |
S20 |
1 |
0.595 |
0.593 |
0.593 |
0.595 |
0.593 |
0.592 |
0.595 |
0.593 |
0.590 |
0.594 |
0.596 |
0.594 |
0.585 |
0.590 |
0.590 |
0.592 |
0.589 |
0.590 |
0.588 |
0.590 |
2 |
0.769 |
0.769 |
0.768 |
0.768 |
0.768 |
0.765 |
0.765 |
0.714 |
0.766 |
0.766 |
0.764 |
0.763 |
0.759 |
0.761 |
0.761 |
0.762 |
0.762 |
0.762 |
0.761 |
0.761 |
3 |
0.869 |
0.867 |
0.867 |
0.866 |
0.865 |
0.865 |
0.866 |
0.865 |
0.866 |
0.865 |
0.865 |
0.865 |
0.865 |
0.863 |
0.866 |
0.864 |
0.865 |
0.864 |
0.866 |
0.866 |
4 |
0.946 |
0.944 |
0.944 |
0.944 |
0.942 |
0.943 |
0.944 |
0.943 |
0.944 |
0.943 |
0.943 |
0.943 |
0.943 |
0.942 |
0.942 |
0.943 |
0.943 |
0.942 |
0.943 |
0.943 |
5 |
1.000 |
1.000 |
1.000 |
1.000 |
1.000 |
1.000 |
1.000 |
1.000 |
1.000 |
1.000 |
1.000 |
1.000 |
1.000 |
1.000 |
1.000 |
1.000 |
1.000 |
1.000 |
1.000 |
1.000 |
6 |
1.070 |
1.070 |
1.069 |
1.071 |
1.071 |
1.070 |
1.071 |
1.071 |
1.071 |
1.070 |
1.070 |
1.070 |
1.070 |
1.070 |
1.070 |
1.070 |
1.070 |
1.071 |
1.070 |
1.070 |
7 |
1.136 |
1.138 |
1.137 |
1.138 |
1.137 |
1.137 |
1.138 |
1.137 |
1.138 |
1.138 |
1.138 |
1.139 |
1.137 |
1.136 |
1.137 |
1.137 |
1.137 |
1.138 |
1.138 |
1.138 |
8 |
1.223 |
1.226 |
1.224 |
1.227 |
1.226 |
1.226 |
1.226 |
1.225 |
1.225 |
1.226 |
1.226 |
1.229 |
1.226 |
1.224 |
1.225 |
1.224 |
1.224 |
1.225 |
1.224 |
1.226 |
9 |
1.513 |
1.517 |
1.522 |
1.518 |
1.511 |
1.513 |
1.513 |
1.511 |
1.526 |
1.517 |
1.518 |
1.520 |
1.513 |
1.513 |
1.513 |
1.514 |
1.515 |
1.515 |
1.515 |
1.518 |
10 |
1.591 |
1.596 |
1.595 |
1.597 |
1.589 |
1.591 |
1.591 |
1.588 |
1.595 |
1.594 |
1.596 |
1.598 |
1.591 |
1.590 |
1.590 |
1.592 |
1.593 |
1.593 |
1.593 |
1.597 |
11 |
1.729 |
1.735 |
1.733 |
1.734 |
1.725 |
1.728 |
1.729 |
1.725 |
1.732 |
1.734 |
1.736 |
1.737 |
1.731 |
1.730 |
1.730 |
1.731 |
1.734 |
1.733 |
1.734 |
1.739 |
12 |
1.749 |
1.754 |
1.753 |
1.754 |
1.745 |
1.747 |
1.749 |
745 |
1.751 |
1.753 |
- |
- |
- |
- |
- |
- |
- |
- |
- |
- |
13 |
1.791 |
1.795 |
1.794 |
1.795 |
1.787 |
1.790 |
1.791 |
1.788 |
1.793 |
1.797 |
1.798 |
1.798 |
1.792 |
1.791 |
1.792 |
1.793 |
1.795 |
1.795 |
1.795 |
1.800 |
14 |
1.854 |
1.859 |
1.858 |
1.859 |
1.850 |
1.855 |
1.855 |
1.852 |
1.858 |
1.861 |
1.864 |
1.863 |
1.857 |
1.856 |
1.858 |
1.858 |
1.860 |
1.860 |
1.861 |
1.866 |
15 |
1.949 |
1.955 |
1.952 |
1.954 |
1.944 |
1.950 |
1.949 |
1.946 |
1.952 |
1.954 |
1.959 |
1.958 |
1.952 |
1.951 |
1.953 |
1.954 |
1.956 |
1.955 |
1.956 |
1.961 |
16 |
2.004 |
2.009 |
2.006 |
2.09 |
1.998 |
2.004 |
2.003 |
2.000 |
2.006 |
2.009 |
2.014 |
2.013 |
2.006 |
2.005 |
2.008 |
2.008 |
2.010 |
2.009 |
2.010 |
2.016 |
17 |
2.033 |
2.037 |
2.034 |
2.039 |
2.027 |
2.032 |
2.032 |
2.029 |
2.034 |
2.038 |
2.042 |
2.041 |
2.034 |
2.033 |
2.037 |
2.037 |
2.040 |
2.039 |
2.039 |
2.045 |
18 |
2.059 |
2.063 |
2.060 |
2.065 |
2.053 |
2.059 |
2.059 |
2.055 |
2.062 |
2.064 |
2.069 |
2.068 |
2.061 |
2.059 |
2.063 |
2.064 |
2.066 |
2.066 |
2.066 |
2.072 |
19 |
2.170 |
2.175 |
2.173 |
2.177 |
2.165 |
2.172 |
2.172 |
2.167 |
2.175 |
2.176 |
2.182 |
2.181 |
2.174 |
2.173 |
2.175 |
2.177 |
2.178 |
2.179 |
2.180 |
2.185 |
20 |
2.205 |
2.210 |
2.207 |
2.213 |
2.200 |
2.207 |
2.207 |
2.200 |
2.209 |
2.209 |
- |
- |
- |
- |
- |
- |
- |
- |
- |
- |
21 |
2.473 |
2.482 |
2.480 |
2.485 |
2.471 |
2.478 |
2.474 |
2.468 |
2.483 |
2.478 |
2.487 |
2.486 |
2.478 |
2.474 |
2.479 |
2.480 |
2.482 |
2.483 |
2.481 |
2.485 |
22 |
2.737 |
2.744 |
2.739 |
2.739 |
2.731 |
2734 |
2.732 |
2.727 |
2.744 |
2.740 |
2.750 |
2.751 |
2.738 |
2.733 |
2.739 |
2.739 |
2.743 |
2.744 |
2.745 |
2.750 |
23 |
- |
- |
- |
- |
- |
- |
- |
- |
- |
- |
3.005 |
2.743 |
2.742 |
2.741 |
2.740 |
2.740 |
2.746 |
2.739 |
2.741 |
2.741 |
24 |
- |
- |
- |
- |
- |
- |
- |
- |
- |
- |
3.170 |
3.169 |
3.155 |
3.149 |
3.154 |
3.156 |
3.161 |
3.160 |
3.162 |
3.169 |
25 |
3.277 |
3.285 |
3.283 |
3.288 |
3.266 |
3.280 |
3.276 |
3.267 |
3.284 |
3.284 |
3.294 |
3.292 |
3.280 |
3.274 |
3.278 |
3.280 |
3.286 |
3.286 |
3.286 |
3.295 |
Table 4.Relative peak areas of common peaks in UPLC fingerprint ofDipsacus asperW. and formula granules
表4.续断药材及配方颗粒UPLC指纹图谱共有峰的相对峰面积
共有峰 |
S1 |
S2 |
S3 |
S4 |
S5 |
S6 |
S7 |
S8 |
S9 |
S10 |
S11 |
S12 |
S13 |
S14 |
S15 |
S16 |
S17 |
S18 |
S19 |
S20 |
1 |
0.0197 |
0.1105 |
0.0120 |
0.0767 |
0.1524 |
0.1663 |
0.0206 |
0.0116 |
0.1658 |
0.1081 |
0.3664 |
0.3411 |
0.3580 |
0.3584 |
0.3862 |
0.3822 |
0.3609 |
0.3623 |
0.3837 |
0.3796 |
2 |
0.0730 |
0.0519 |
0.0430 |
0.0388 |
0.0729 |
0.0834 |
0.0230 |
0.1520 |
0.0758 |
0.2095 |
0.8848 |
0.8808 |
0.8591 |
0.8626 |
0.8723 |
0.8716 |
0.8720 |
0.8758 |
0.8818 |
0.8803 |
3 |
0.3607 |
0.6426 |
0.2188 |
1.0724 |
0.9547 |
1.8661 |
0.5948 |
1.7333 |
0.2523 |
0.6548 |
1.1353 |
1.1251 |
1.2061 |
1.2456 |
1.2546 |
1.1047 |
1.1264 |
1.1267 |
1.3563 |
1.3601 |
4 |
0.0277 |
0.0880 |
0.0651 |
0.0965 |
0.1265 |
0.0968 |
0.0409 |
0.0489 |
0.0639 |
0.1584 |
0.2220 |
0.2407 |
0.2211 |
0.2130 |
0.2305 |
0.2252 |
0.2396 |
0.2286 |
0.3073 |
0.2957 |
5 |
1.0000 |
1.0000 |
1.0000 |
1.0000 |
1.0000 |
1.0000 |
1.0000 |
1.0000 |
1.0000 |
1.0000 |
1.0000 |
1.0000 |
1.0000 |
1.0000 |
1.0000 |
1.0000 |
1.0000 |
1.0000 |
1.0000 |
1.0000 |
6 |
0.0174 |
0.0152 |
0.0154 |
0.0214 |
0.0360 |
0.0360 |
0.0654 |
0.1370 |
0.0175 |
0.0480 |
0.7856 |
0.7994 |
0.7808 |
0.7754 |
0.7967 |
0.7985 |
0.7883 |
0.7821 |
0.7808 |
0.7825 |
7 |
0.1350 |
0.0768 |
0.0394 |
0.1327 |
0.3727 |
0.1819 |
0.0544 |
0.0486 |
0.1120 |
0.3227 |
0.2037 |
0.2167 |
0.2110 |
0.2052 |
0.2227 |
0.2239 |
0.2162 |
0.2095 |
0.2200 |
0.2185 |
8 |
0.3092 |
0.3763 |
0.1674 |
0.3089 |
0.5241 |
0.7943 |
0.4504 |
0.5499 |
0.2930 |
0.7934 |
0.4934 |
0.5096 |
0.4821 |
0.4775 |
0.4937 |
0.4869 |
0.5106 |
0.4992 |
0.6163 |
0.5978 |
9 |
0.0769 |
0.0998 |
0.1492 |
0.0390 |
0.1186 |
0.2299 |
0.1421 |
0.3487 |
0.0400 |
0.6435 |
0.2730 |
0.3041 |
0.2833 |
0.2686 |
0.3000 |
0.2990 |
0.2912 |
0.2765 |
0.3009 |
0.2775 |
10 |
0.0555 |
0.0357 |
0.0346 |
0.0320 |
0.1055 |
0.1266 |
0.0537 |
0.2238 |
0.0000 |
0.2637 |
0.0937 |
0.1201 |
0.1049 |
0.0941 |
0.1156 |
0.1150 |
0.1061 |
0.0954 |
0.1009 |
0.0981 |
11 |
0.0419 |
0.0632 |
0.0429 |
0.0331 |
0.1747 |
0.1120 |
0.1127 |
0.1560 |
0.0750 |
0.2765 |
0.1928 |
0.2328 |
0.2080 |
0.1923 |
0.2209 |
0.2153 |
0.2324 |
0.2102 |
0.3699 |
0.2798 |
12 |
0.0867 |
0.0602 |
0.0714 |
0.0514 |
0.1094 |
0.2008 |
0.0810 |
0.2209 |
0.0364 |
0.3497 |
- |
- |
- |
- |
- |
- |
- |
- |
- |
- |
13 |
0.1349 |
0.2682 |
0.2714 |
0.0975 |
0.2484 |
0.3274 |
0.4448 |
0.7455 |
0.2255 |
1.2789 |
1.6228 |
1.6519 |
1.6036 |
1.5929 |
1.6442 |
1.6489 |
1.6114 |
1.6035 |
1.5413 |
1/5540 |
14 |
1.3520 |
1.0683 |
1.3625 |
1.7214 |
1.0516 |
1.6755 |
1.5321 |
2.2665 |
1.9272 |
7.7933 |
1.2822 |
1.9174 |
1.8375 |
1.8431 |
1.3116 |
1.8662 |
1.9004 |
1.3045 |
1.2453 |
1.2513 |
15 |
0.5941 |
0.7096 |
1.1918 |
0.6001 |
1.5286 |
1.0621 |
1.1277 |
1.8215 |
0.9498 |
4.3921 |
1.6521 |
1.7795 |
1.7365 |
1.7159 |
1.6832 |
1.6745 |
1.7475 |
1.6736 |
1.7091 |
1.6861 |
16 |
0.0725 |
0.0835 |
0.0704 |
0.0808 |
0.1166 |
0.2023 |
0.1383 |
0.2647 |
0.1741 |
0.7838 |
0.1898 |
0.2295 |
0.2058 |
0.1868 |
0.2227 |
0.2226 |
0.2105 |
0.1915 |
0.2046 |
0.2037 |
17 |
0.0689 |
0.0589 |
0.0887 |
0.0331 |
0.0937 |
0.1437 |
0.0881 |
0.2319 |
0.0643 |
0.3633 |
0.0853 |
0.1156 |
0.0988 |
0.0846 |
0.1091 |
0.1088 |
0.1000 |
0.0855 |
0.0905 |
0.0882 |
18 |
0.1939 |
0.1491 |
0.1918 |
0.0857 |
0.2761 |
0.4800 |
0.2318 |
0.7938 |
0.1581 |
1.2352 |
0.2036 |
0.2431 |
0.2186 |
0.1990 |
0.2363 |
0.2330 |
0.2212 |
0.2023 |
0.2132 |
0.2112 |
19 |
0.0648 |
0.0315 |
0.0377 |
0.2081 |
0.0824 |
0.0796 |
0.0686 |
0.1064 |
0.0521 |
0.5847 |
0.0795 |
0.1210 |
0.0918 |
0.0792 |
0.1055 |
0.1014 |
0.1088 |
0.0916 |
0.1813 |
0.1699 |
20 |
0.0982 |
0.1134 |
0.1339 |
0.0654 |
0.1926 |
0.1424 |
0.1230 |
0.1609 |
0.1196 |
1.0976 |
- |
- |
- |
- |
- |
- |
- |
- |
- |
- |
21 |
0.0309 |
0.0373 |
0.0353 |
0.0379 |
0.0471 |
0.0880 |
0.0705 |
0.1202 |
0.0941 |
0.3126 |
0.3242 |
0.3175 |
0.3123 |
0.3185 |
0.3142 |
0.3116 |
0.3189 |
0.3227 |
0.3461 |
0.3399 |
22 |
1.4506 |
0.8854 |
0.1426 |
0.0093 |
2.8169 |
1.7316 |
0.6781 |
1.3997 |
1.1157 |
5.4585 |
2.3649 |
2.3262 |
2.2651 |
2.2901 |
2.2908 |
2.2830 |
2.3396 |
2.3564 |
2.5270 |
2.5010 |
23 |
- |
- |
- |
- |
- |
- |
- |
- |
- |
- |
0.0443 |
0.0438 |
0.0427 |
0.0432 |
0.0427 |
0.0430 |
0.0441 |
0.0442 |
0.0473 |
0.0473 |
24 |
- |
- |
- |
- |
- |
- |
- |
- |
- |
- |
0.0704 |
0.0694 |
0.0670 |
0.0678 |
0.0679 |
0.0678 |
0.0694 |
0.0701 |
0.0754 |
0.0735 |
25 |
0.0545 |
0.0207 |
0.0059 |
0.0477 |
0.0323 |
0.0358 |
0.0150 |
0.0238 |
0.0274 |
0.1219 |
0.0401 |
0.0399 |
0.0383 |
0.0392 |
0.0392 |
0.0390 |
0.0397 |
0.0399 |
0.0432 |
0.426 |
3.6. 指纹图谱相似度评价
分别将10批药材及10批配方颗粒的色谱数据导入“中药色谱指纹图谱相似度评价系统2012A版”,进行匹配,时间窗为0.40,采用中位数法考察色谱峰相似度的一致性,结果见表5,续断药材的相似度均大于0.8,但相似度相差较大,其中S2的相似度最低,S7的最高;配方颗粒的相似度大于0.9,除S9和S10外,其余批次的相似度差异较小。同时将10批药材与10批配方颗粒的色谱数据导入“中药色谱指纹图谱相似度评价系统2012A版”,进行匹配,结果见表6,续断与配方颗粒的相似系数均大于0.8,药材与配方颗粒有着明显差异。
Table 5.Similarity betweenDipsacus asperW. and formula granules
表5.续断药材、续断配方颗粒的相似度
续断药材 |
相似度 |
续断配方颗粒 |
相似度 |
S1 |
0.903 |
S1 |
0.991 |
S2 |
0.800 |
S2 |
0.997 |
S3 |
0.899 |
S3 |
0.998 |
S4 |
0.879 |
S4 |
0.998 |
S5 |
0.879 |
S5 |
0.992 |
S6 |
0.914 |
S6 |
0.997 |
S7 |
0.967 |
S7 |
0.998 |
S8 |
0.927 |
S8 |
0.992 |
S9 |
0.942 |
S9 |
0.982 |
S10 |
0.913 |
S10 |
0.984 |
Table 6.Comparison of Similarity betweenDipsacus asper W. and formula granules
表6.续断药材与配方颗粒的相似度比较
续断药材 |
相似度 |
续断配方颗粒 |
相似度 |
S1 |
0.833 |
S11 |
0.936 |
S2 |
0.685 |
S12 |
0.954 |
S3 |
0.813 |
S13 |
0.977 |
S4 |
0.844 |
S14 |
0.976 |
S5 |
0.844 |
S15 |
0.961 |
S6 |
0.816 |
S16 |
0.952 |
S7 |
0.855 |
S17 |
0.953 |
S8 |
0.846 |
S18 |
0.937 |
S9 |
0.821 |
S19 |
0.921 |
S10 |
0.864 |
S20 |
0.922 |
4. 讨论
本文初步建立了续断药材和配方颗粒的UPLC指纹图谱,对10批续断药材和10批续断的配方颗粒进行了研究,发现药材与配方颗粒剂之间的共有峰存在差异,说明药材经提取、浓缩、制粒等制备工艺后,化学成分有所变化,并采用指纹图谱相似度评价软件对续断药材和配方颗粒进行了相似度评价,续断药材和配方颗粒均有较好的相似度,相关系数均大于0.8。10批药材中S2相似度最低,成分存在差异,说明不同药材之间成分存在个体差异,采收时间、生长年限和土壤类型等因素可能是造成差异的主要原因,因此在制备成配方颗粒时需要注意对药材进行分析鉴别,保障续断来源的可靠性,确保配方颗粒的有效性和准确性。
配方颗粒中的共有峰较药材中的共有峰多,可能是由于制剂工艺过程中(如高温提取、浓缩、辅料添加等)产生的,这些成分是在制剂过程中其他成分受热相互作用产生还是由其他成分转化,有待进一步的研究[20][21]。续断配方颗粒是由续断饮片加工制成,被广泛应用于临床上,但是续断饮片的加工过程复杂,需经历“发汗”、炮制(炒续断、盐续断、酒续断)等步骤,导致续断品质有所差异,对续断的配方颗粒进行质量评价是很有必要的。因此,本实验使用UPLC技术建立了续断和其配方颗粒的指纹图谱,相较于HPLC技术,大大节约了分析时间,减少了溶剂用量,提高了检测效率,能够较为准确的反映药材与配方颗粒的组成差异。后续还可利用UPLC结合质谱的分析技术,进一步对药材及配方颗粒的成分及含量进行检测,为续断的配方颗粒质量标准和临床应用提供参考依据。
基金项目
贵州省一流课程重点建设项目(项目合同编号:黔教高发[2017] 158);2022年度贵州省级“金课”(证书编号:2022JKXX0018)。
NOTES
*第一作者。
#通讯作者。