1. 引言
岩白菜素[1](bergenin)为异香豆素类化合物，因最早从岩白菜属植物中提取出来而得名，药理实验发现其具有护肝、抗溃疡、提高免疫等作用[2][3]，已经被开发成各种剂型药物[4]。随着岩白菜素功效被深度挖掘，社会各方面对其需求越来越大，做为其提取原料的岩白菜属植物，目前人工栽培较少，仅靠采挖野生种做原料，导致野生资源越来越少，接近濒危状态。并且盲目的滥采滥挖，对于药效含量不明确的前提下，又会导致提取率低下，加剧了资源的浪费。
针对这一状况，项目组在岩白菜属植物资源收集的基础上，通过测定该属植物不同种类的岩白菜素含量，并对比了野生种与栽培种的岩白菜素含量，为其药用种类的选择，人工栽培以及深度开发、提取、分离提供参考。根据民间食用岩白菜的情况，按本试验测定结果，初步探讨了该属植物的食用安全性及食用限量。
2. 材料
岩白菜素标准品，由上海安谱实验科技股份有限公司提供。
测定种类为厚叶岩白菜、秦岭岩白菜、岩白菜、峨眉岩白菜三年生野生种苗、厚叶岩白菜1~3年生人工栽培种苗。
测定部位为新鲜根茎、自然干燥根茎、新鲜叶片和自然干燥叶片。
3. 方法
综合多家研究机构测定岩白菜素的方法[5]-[7]，本研究中测定方法如下。
3.1. 色谱条件
色谱柱为KromasilC18柱(250 mm × 4.6 mm, 5 μm)；柱温(30 ± 0.5)℃；流动相为甲醇–水(25:75)；流速1.0 mL/min；检测波长275 nm。进样量10 µL，理论塔板数按岩白菜素峰计算不低于3000。
3.2. 仪器与试剂
LC-2010液相色谱仪包括SPD-10Avp紫外检测器、Class-vp色谱工作站(日本岛津)；TU-1901双波束紫外分光光度仪；AS5150A超声波清洗器；TGL-16G高速离心机；TG328A十万分之一电子天平；多用粉碎机；10 mL容量瓶、50 mL容量瓶等。
甲醇为色谱纯；水为重蒸馏水；其他试剂均为分析纯。
3.3. 测定步骤
3.3.1. 制备对照品溶液
精密称取10 mg岩白菜素对照品，置10 mL容量瓶中，加甲醇定容，摇匀，即为岩白菜素贮备液；精密量取1 mL贮备液，置10 mL量瓶中，加甲醇定容，摇匀，即得0.1 mg/mL对照品溶液。
3.3.2. 制备供试品溶液
取过四号筛的250 mg药材细粉，精密称定，置50 mL量瓶中，加甲醇适量，超声处理(300 W, 25 kHz) 40 min，放冷，加甲醇定容，摇匀，过滤，离心，即得供试品溶液。注入色谱仪记录峰面积，根据标准曲线计算岩白菜素含量。
3.4. 数据处理
统计数据时，每种处理重复三次，统计鲜重、烘干后重量，计算失水率、测定岩白菜素含量。
失水率 = 烘干前重量 − 烘干后重量/烘干前重量 * 100%；岩白菜素含量 = 岩白菜素重量/烘干前重量 * 100%。
使用SPSS (SPSS Inc, Chica go, USA)软件包进行统计分析，并对数据进行差异分析(ANOVA)。
4. 试验结果
4.1. 野生种岩白菜素含量测定
刘斌等对厚叶岩白菜内含物做了详细分析测定，共分离获得12种化合物[8]，本研究样品经过烘干(图1(a)，图1(b))、磨粉(图1(c))、过筛(图1(d))、定量(图1(f))、提取(图1(f)，图1(g))等环节，主要测定了四个种类不同部位(根茎、叶片)的岩白菜素含量。
结果显示：四个种类的岩白菜，鲜叶岩白菜素含量为0.191%~0.601%，不同种类间差异不显著；干叶岩白菜素含量为0.256%~0.615%，不同种类间差异显著。本次测定结果显示，同一种类中，干叶的岩白菜素含量略高于鲜叶含量，但差异不显著(表1)。
四个种类的鲜根中，岩白菜素含量为1.016%~2.653%，差异显著；干根岩白菜素含量为1.859%~3.701%，差异显著。同一种类中，干根的岩白菜素含量高于鲜根的。不同种类中，厚叶岩白菜岩白菜素含量最高，秦岭岩白菜次之(表1)。
4.2. 栽培种岩白菜素含量测定
项目组在福建省宁德市海拔400米处，栽培种植厚叶岩白菜组培苗5万株，并测定不同苗龄根茎的岩白菜素含量[9]。结果如下：一年生根茎，岩白菜素含量为1.43%(图2(a))；两年生根茎含量为2.53%(图2(b))；三年生根茎，含量为3.65% (表2)。随栽培时间延长，岩白菜素含量在增加，根茎横切面微黄(图2(c))，叶片苦味明显，表现出野生种的特征，岩白菜素含量接近同龄野生植物标准(3.701%) (表1)。
4.3. 食用安全性评价
四川省峨眉市中药材市场中，岩白菜属植物根茎比较常见，主治清热润肺、咳血吐血、长年久咳、咽炎、支气管炎、哮喘等，更是哮喘病人的常备中药材。根茎用药在当地已经很成熟(图1(h))，每次取25克干货，熬水或者与肉类一起煲汤炖煮，做为一种特色蔬菜食用。陕西、山东等地，常取岩白菜3~6张叶片，切碎拌入鸡蛋中翻炒，对于清凉败火及治疗口舌生疮，疗效显著。
根据本项目测定结果(峨眉岩白菜干根含量2.053%)，结合市民常用量，粗略计算得每次食用限量为：根茎重量 * 含量 = 25 g * 2.053% = 0.5133 g。按鲜叶片岩白菜素含量最高值(0.601%，表1)，据此推导
Figure 1.The determination of bergenin content. ((a), (b)) Sample, (c) Abrasive dust, (d) Sieving, (e) Ration, ((f), (g)) Extract, H. Rhizome
图1.岩白菜素含量测定。((a), (b))样品；(c)磨粉；(d)过筛；(e)定量；((f), (g))提取；(h)根茎
Table1.The content of bergenin in different species and parts ofBergenia Moench
表1.不同种及不同部位岩白菜素含量
种名 |
取样部位 |
烘干前重量(克) |
烘干后重量(克) |
失水率% |
岩白菜素含量% |
厚叶岩白菜 |
鲜叶片 |
84.50 |
19.86 |
76.50 ± 0.73 |
0.601 ± 0.059gh |
厚叶岩白菜 |
干叶片 |
52.91 |
32.54 |
38.50 ± 1.33 |
0.615 ± 0.014g |
厚叶岩白菜 |
鲜根 |
118.15 |
63.00 |
46.68 ± 2.19 |
2.653 ± 0.107b |
厚叶岩白菜 |
干根 |
102.33 |
93.25 |
8.87 ± 1.02 |
3.701 ± 0.107a |
秦岭岩白菜 |
鲜叶片 |
145.71 |
33.44 |
77.05 ± 0.07 |
0.571 ± 0.031hi |
秦岭岩白菜 |
干叶片 |
61.86 |
44.33 |
28.34 ± 0.71 |
0.575 ± 0.032h |
秦岭岩白菜 |
鲜根 |
124.27 |
79.98 |
35.64 ± 2.44 |
2.186 ± 0.113cd |
秦岭岩白菜 |
干根 |
113.55 |
98.99 |
12.82 ± 1.41 |
2.303 ± 0.231c |
岩白菜 |
鲜叶片 |
43.65 |
12.11 |
72.26 ± 0.17 |
0.191 ± 0.005m |
岩白菜 |
干叶片 |
39.95 |
29.24 |
26.81 ± 2.5f |
0.256 ± 0.045l |
续表
岩白菜 |
鲜根 |
104.23 |
67.88 |
34.87 ± 1.41 |
1.016 ± 0.132f |
岩白菜 |
干根 |
62.82 |
51.22 |
18.47 ± 1.15 |
1.859 ± 0.103e |
峨眉岩白菜 |
鲜叶片 |
215.67 |
60.97 |
71.73 ± 0.84 |
0.511 ± 0.009jk |
峨眉岩白菜 |
干叶片 |
34.04 |
25.57 |
24.88 ± 1.77 |
0.515 ± 0.012j |
峨眉岩白菜 |
鲜根 |
108.78 |
29.00 |
73.34 ± 0.89 |
1.881 ± 0.088e |
峨眉岩白菜 |
干根 |
72.13 |
63.23 |
12.34 ± 1.05 |
2.053 ± 0.116d |
同列不同小写字母表示各处理间差异显著(P < 0.05)，下同。
Table2.The content of bergenin of different seedling ages
表2.不同苗龄岩白菜素含量
种名 |
苗龄(年) |
含量(%) |
厚叶岩白菜 |
1 |
1.43 ± 0.12c |
厚叶岩白菜 |
2 |
2.54 ± 0.21b |
厚叶岩白菜 |
3 |
3.65 ± 0.18a |
Figure2.The rhizome ofB.crassifolia(L.) Fritsch at different seedling ages. (a) Rhizomes of one-year-old seedlings, (b) Rhizomes of two-year-old seedlings, (c) Rhizomes of three-year-old seedlings.
图2.厚叶岩白菜不同苗龄组培苗根茎。(a) 一年生根茎；(b) 两年生根茎；(c) 三年生根茎
计算得每次叶片食用限量为：0.5133 g/0.601% = 85.41 g (干叶片重量)；进一步推导得每次鲜叶片食用限量重量为：85.41 g/(1 − 76.5%) = 363.45 g；而一张鲜嫩叶片重量约为5 g，则每次食用安全限量为：363.45 g/5g/张 = 72.69张。
5. 结果分析
本次测定结果显示，厚叶岩白菜和秦岭岩白菜，药材含量较高，是做为药材种植的优良种类。同一种类中，根部的岩白菜素含量远远高于叶片含量，根部是提取原料的首选；同时发现鲜叶中岩白菜素含量仅略低于干叶，推测叶片在干燥过程中，也会伴随着岩白菜素的流失，鉴于此，种植户可以直接收割鲜叶片做为提取原材料，避免了晾晒等繁重工作量。
对于栽培种，进行了连续三年的岩白菜素测试，结果显示，随栽培时间延长，种苗根系加粗，叶片苦味明显，岩白菜素含量提高明显，接近野生种的含量。因此采用人工繁殖及栽培，扩大种苗数量，提高种苗质量，用于岩白菜素的提取是可行的。
通过测定不同种类、同株不同部位(叶片、根茎)的岩白菜素，对该属植物的药材含量有了一定的数据积累，对于筛选优良种、做为特色蔬菜食疗和药材种植成本核算，起一定的参考作用。项目组后续会继续测定不同种植点的药材含量，在大量数据积累的基础上，分析其中内在规律，形成人工繁殖、栽培种植和药物提取的产业链，为大规模开发提供保障。
基金项目
新疆阿勒泰地区科技计划项目(厚叶岩白菜栽培种植与成份分析研究，编号2023005)资助。
NOTES
*第一作者。
#通讯作者。