PI Pharmacy Information 2160-441X Scientific Research Publishing 10.12677/pi.2024.133031 PI-87767 pi2024133_141710499.pdf 医药卫生 泽泻及其配方颗粒的HPLC指纹图谱研究 Study on HPLC Fingerprint of Alisma plantago-aquatica Linn. and Its Formula Granules 玉兰 2 1 小松 2 1 祥培 3 1 红梅 2 1 贵州中医药大学药学院,贵州 贵阳 贵州民族大学学民族医药学院,贵州 贵阳 null 09 05 2024 13 03 261 269 © Copyright 2014 by authors and Scientific Research Publishing Inc. 2014 This work is licensed under the Creative Commons Attribution International License (CC BY). http://creativecommons.org/licenses/by/4.0/

目的:建立泽泻药材及其配方颗粒的HPLC指纹图谱。方法:色谱柱为ACQUITY HPLC BEH C18(2.1 mm × 100 mm, 1.7 μm),流动相为0.05%磷酸水溶液–乙腈,梯度洗脱,流速为0.1 mL/min;检测波长为210 nm;柱温为30℃;进样量为2 μL。建立泽泻及其配方颗粒指纹图谱,并采用中药色谱指纹图谱评价系统进行相似度分析。结果:20批泽泻药材及其配方颗粒的HPLC指纹图谱共确认13个共有峰,泽泻药材及配方颗粒指纹图谱相似度在0.502~0.989之间,两者化学成分存在一定差异。结论:建立了稳定、可行的泽泻药材及配方颗粒指纹图谱,可为泽泻药材及其配方颗粒质量与评价提供参考依据。 Objective: To establish HPLC fingerprint of Alisma plantago-aquatica Linn. and its formula granules. Methods: The chromatography was performed on ACQUITY HPLC BEH C18 (2.1 mm × 100 mm, 1.7 μm) column with mobile phase consisting of 0.05% phosphoric acid aqueous solution acetonitrile and gradient elution at the flow rate of 0.1 mL/min. The detection wavelength was 210 nm. The column temperature was 30˚C. The sample size was 2 μL. The fingerprint of Alisma plantago-aquatica Linn. and its formula granules was established, and the similarity analysis was carried out by the TCM chromatographic fingerprint evaluation system. Results: A total of 13 common peaks were identified by HPLC fingerprints of 20 batches of Alisma plantago-aquatica Linn. and its formula granules. The similarity of fingerprints of Alisma plantago-aquatica Linn. and formula granules ranged from 0.502 to 0.989, and there were certain differences in chemical components between them. Conclusion: A stable and feasible fingerprint of Alisma plant a go-aquatica Linn. and its formula granules was established, which can provide reference for the quality and evaluation of Alisma plantago-aquatica Linn. and its formula granules.

泽泻,HPLC指纹图谱,配方颗粒, Alisma plantago-aquatica Linn. HPLC Fingerprint Formula Granule
摘要

目的:建立泽泻药材及其配方颗粒的HPLC指纹图谱。方法:色谱柱为ACQUITY HPLC BEH C18(2.1 mm × 100 mm, 1.7 μm),流动相为0.05%磷酸水溶液–乙腈,梯度洗脱,流速为0.1 mL/min;检测波长为210 nm;柱温为30℃;进样量为2 μL。建立泽泻及其配方颗粒指纹图谱,并采用中药色谱指纹图谱评价系统进行相似度分析。结果:20批泽泻药材及其配方颗粒的HPLC指纹图谱共确认13个共有峰,泽泻药材及配方颗粒指纹图谱相似度在0.502~0.989之间,两者化学成分存在一定差异。结论:建立了稳定、可行的泽泻药材及配方颗粒指纹图谱,可为泽泻药材及其配方颗粒质量与评价提供参考依据。

关键词

泽泻,HPLC指纹图谱,配方颗粒

Study on HPLC Fingerprint of Alisma plantago-aquatica Linn. and Its Formula Granules<sup> </sup>

Yulan Liao1, Xiaosong Yang1, Xiangpei Wang2, Hongmei Wu1*

1School of Pharmacy, Guizhou University of Traditional Chinese Medicine, Guiyang Guizhou

2School of Chinese Ethnic Medicine, Guizhou Minzu University, Guiyang Guizhou

Received: Apr. 25th, 2024; accepted: May 23rd, 2024; published: May 30th, 2024

ABSTRACT

Objective: To establish HPLC fingerprint of Alisma plantago-aquatica Linn. and its formula granules. Methods: The chromatography was performed on ACQUITY HPLC BEH C18 (2.1 mm × 100 mm, 1.7 μm) column with mobile phase consisting of 0.05% phosphoric acid aqueous solution acetonitrile and gradient elution at the flow rate of 0.1 mL/min. The detection wavelength was 210 nm. The column temperature was 30˚C. The sample size was 2 μL. The fingerprint of Alisma plantago-aquatica Linn. and its formula granules was established, and the similarity analysis was carried out by the TCM chromatographic fingerprint evaluation system. Results: A total of 13 common peaks were identified by HPLC fingerprints of 20 batches of Alisma plantago-aquatica Linn. and its formula granules. The similarity of fingerprints of Alisma plantago-aquatica Linn. and formula granules ranged from 0.502 to 0.989, and there were certain differences in chemical components between them. Conclusion: A stable and feasible fingerprint of Alisma plantago-aquatica Linn. and its formula granules was established, which can provide reference for the quality and evaluation of Alisma plantago-aquatica Linn. and its formula granules.

Keywords:Alisma plantago-aquatica Linn., HPLC Fingerprint, Formula Granule

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1. 引言

泽泻为泽泻科植物泽泻Alisma plantago-aquatica Linn.的干燥块茎,主产于福建和四川等地 [ 1 ] ,其气微,味微苦,具有利水渗湿,泄热,化浊降脂的功效 [ 2 ] ,常用于治疗小便不利,水肿胀满,高脂血症,泄泻尿少,热淋涩痛等症 [ 3 ] 。现代研究表明,泽泻主要含有三萜类和倍半萜类化学成分 [ 4 ] ,其醇提物、水提物及单体化合物具有降血糖、调血脂 [ 5 ] 、保肝、利尿、抗氧化损伤 [ 6 ] 、抗炎、抗肿瘤等多种药理作用。泽泻配方颗粒是以泽泻饮片为原料,经过提取、分离、浓缩、干燥、制粒等生产工艺,加工制成的具有一定规格的新型配方颗粒 [ 7 ] 。但由于地理来源、气候条件、加工方式和环境等因素的不同 [ 8 ] ,泽泻中各成分的种类和含量有一定差异 [ 9 ] 。且不同产地的泽泻药材指纹图谱分析显示,其药材质量存在差异 [ 10 ] 。但针对泽泻药材及其配方颗粒的指纹图谱的差异性研究尚未见报道。HPLC指纹图谱分析因其优势和通用性一直被视为首选,能够较全面地反映和评估中药中多类成分的整体特征 [ 11 ] ,进而对中药及制剂进行质量评估。因此,本研究建立泽泻药材及其配方颗粒的HPLC指纹图谱,以期为泽泻药材及其配方颗粒的质量控制提供参考依据。

2. 实验材料 2.1. 仪器

ACQUITY HPLC(美国Waters公司);AL204-IC/万分之一分析天平(METTLE RTOLEDO仪器有限公司);KQ-100E型超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)。

2.2. 试剂

甲醇,乙腈为色谱纯(默克股份两合公司,德国),磷酸(国药集团化学试剂有限公司),水为哇哈哈纯净水(贵州娃哈哈集团有限公司),其余试剂均为分析纯。

2.3. 药材

10批泽泻药材经贵州民族大学民族医药学院王祥培教授鉴定,均为泽泻科植物泽泻Alisma plantago-aquatica Linn.的干燥块茎,20批泽泻药材及其配方颗粒均来源于广东一方制药有限公司,样品来源见表1。

Source of Alisma plantago-aquatica Linn. and its formula granule
NO 类型 批号 NO 类型 来源
S1 药材 J2019010305-01 S11 配方颗粒 广东一方制药有限公司
S2 药材 J2019020101-01 S12 配方颗粒 广东一方制药有限公司
S3 药材 J2019020102-01 S13 配方颗粒 广东一方制药有限公司
S4 药材 J2019020101-02 S14 配方颗粒 广东一方制药有限公司
S5 药材 J2019020103-01 S15 配方颗粒 广东一方制药有限公司
S6 药材 J2019010304-01 S16 配方颗粒 广东一方制药有限公司
S7 药材 J2019020104-01 S17 配方颗粒 广东一方制药有限公司
S8 药材 J2018100303-01 S18 配方颗粒 广东一方制药有限公司
S9 药材 J2018100301-01 S19 配方颗粒 广东一方制药有限公司
S10 药材 J20181000302-01 S20 配方颗粒 广东一方制药有限公司

表1. 泽泻药材及配方颗粒的来源

3. 实验方法 3.1. 色谱条件

ACQUITY HPLC BEH C18(2.1 mm × 100 mm,1.7 μm)色谱柱;流速0.1 mL∙min−1;检测波长210 nm;柱温30℃;进样量2 μL;流动相0.05%磷酸水溶液(A)-乙腈(C),梯度洗脱程序见表2。

Mobile phase gradient elution tabl
时间(t) 0.05%磷酸水(A) 乙腈(C)
0 95 5
5 90 10
15 85 15
20 65 35
30 45 55
35 30 70
40 25 75
65 25 75

表2. 流动相梯度洗脱程序

3.2. 供试品溶液的制备

取10批泽泻药材,粉碎,过4号筛,各取约1 g,精密称定,置锥瓶中,加甲醇25 mL,称定重量,超声提取(功率250 W,频率35 kHz) 45 min,放冷,加甲醇补足减失的重量,摇匀,过滤,取续滤液经0.45 μm微孔滤膜滤过,即得泽泻药材供试品溶液;取10批泽泻配方颗粒,研细,各取约1.0 g,精密称定,置25 mL量瓶中,按药材供试品溶液制备方法制备泽泻配方颗粒供试品溶液。

3.3. 方法学考察 3.3.1. 精密度试验

取同一批次泽泻药材样品,按“3.2.”项下方法制备供试品,按“3.1.”项下色谱方法连续进样6次,并记录各共有峰的保留时间和峰面积,计算各共有峰的相对保留时间和相对峰面积的RSD均小于3.0%,表明仪器精密度良好。

3.3.2. 稳定性试验

取同一批次泽泻药材样品,按“3.2.”项下方法制备供试品,按“3.1.”项下色谱方法分别于0,2,4,8,12和24 h进样测定,并记录各共有峰的保留时间和峰面积,计算各共有峰的相对保留时间和相对峰面积的RSD均小于3.0%,表明样品溶液在24 h内稳定。

3.3.3. 重复性试验

取同一批次泽泻药材样品6份,按“3.2.”项下方法平行制备供试品溶液6份,按“3.1.”项下色谱方法分别进样,并记录各共有峰的保留时间和峰面积,计算各共有峰的相对保留时间和相对峰面积的RSD均小于3.0%,表明该方法重复性良好。

4. 实验结果 4.1. HPLC指纹图谱的建立

指纹图谱的建立,按“3.2.”项下的方法制备分析样品,按“3.1.”项下的色谱条件分别对10批泽泻药材、10批泽泻配方颗粒进行测定,得到各批次样品HPLC色谱图,分别导入中药指纹图谱相似度评价系统(2004A),得到泽泻药材、泽泻配方颗粒、泽泻药材及配方颗粒色谱指纹图谱及对照色谱指纹图谱(见图1~6)。

图1. 10批泽泻药材HPLC指纹图谱

图2. 10批泽泻配方颗粒HPLC指纹图谱

图3. 20批泽泻药材及配方颗粒HPLC指纹图谱

图4. 泽泻药材HPLC对照图谱

图5. 泽泻配方颗粒HPLC对照图谱

图6. 泽泻药材与配方颗粒HPLC对照图谱

4.2. 共有峰的确定

建立的泽泻药材及其配方颗粒的指纹图谱中,10批泽泻药材确定19个共有色谱峰,10批泽泻配方颗粒确定13个共有色谱峰,10批泽泻药材与10批配方颗粒确定13个共有峰。计算各共有峰的相对保留时间与相对峰面积,见表3、表4。

4.3. 相似度评价

采用《中药色谱指纹图谱相似度评价系统软件》(2004版),以生成的对照谱图为参照,各批次供试品指纹图谱与对照谱图进行比较,分别计算10批药材、10批配方颗粒、10批药材及10批配方颗粒的相似度。S1~S10为泽泻药材、S11~S20为泽泻配方颗粒。结果见表5、表6。

Relative retention time of common peaks in 20 batches of Alisma plantago-aquatica Linn. and its formula granule
共有峰 S1 S2 S3 S4 S5 S6 S7 S8 S9 S10 S11 S12 S13 S14 S15 S16 S17 S18 S19 S20
1 0.1382 0.1384 0.1384 0.1391 0.1387 0.1382 0.1384 0.1386 0.1388 0.1382 0.0038 0.0038 0.0038 0.0038 0.0038 0.0038 0.0038 0.0038 0.0038 0.0038
2 0.1514 0.1513 0.1515 0.1521 0.1516 0.1513 0.1512 0.1515 0.1518 0.1512 0.0041 0.0041 0.0041 0.0041 0.0041 0.0041 0.0041 0.0041 0.0041 0.0041
3 0.1573 0.1569 0.1575 0.1581 0.1575 0.1572 0.1572 0.1575 0.1579 0.1571 0.0043 0.0043 0.0043 0.0043 0.0043 0.0043 0.0043 0.0043 0.0043 0.0043
4 0.1799 0.1797 0.1800 0.1804 0.1801 0.1799 0.1799 0.1801 0.1804 0.1799 0.0049 0.0049 0.0049 0.0049 0.0049 0.0049 0.0049 0.0049 0.0049 0.0049
5 0.2031 0.2028 0.2032 0.2037 0.2032 0.2031 0.2032 0.2032 0.2036 0.2032 0.0055 0.0055 0.0055 0.0055 0.0055 0.0055 0.0055 0.0055 0.0055 0.0055
6 0.2217 0.2214 0.2218 0.2224 0.2218 0.2216 0.2216 0.2216 0.2221 0.2216 0.0060 0.0060 0.0060 0.0060 0.0060 0.0060 0.0060 0.0060 0.0060 0.0060
7 0.2800 0.2803 0.2813 0.2819 0.2810 0.2807 0.2808 0.2805 0.2813 0.2808 0.0076 0.0076 0.0076 0.0077 0.0076 0.0076 0.0076 0.0076 0.0076 0.0076
8 0.2864 0.2867 0.2877 0.2885 0.2874 0.2871 0.2880 0.2868 0.2876 0.2872 0.0078 0.0078 0.0078 0.0078 0.0078 0.0078 0.0078 0.0078 0.0078 0.0078
9 0.3406 0.3404 0.3414 0.3421 0.3410 0.3409 0.3400 0.3407 0.3415 0.3408 0.0093 0.0093 0.0093 0.0093 0.0093 0.0093 0.0092 0.0093 0.0093 0.0093
10 0.9533 0.9541 0.9541 0.9541 0.9541 0.9527 0.9542 0.9531 0.9528 0.9530 - - - - - - - - - -
11 0.9746 0.9754 0.9752 0.9753 0.9744 0.9744 0.9751 0.9741 0.9741 0.9742 - - - - - - - - - -
12 (S) 1.0000 1.0000 1.0000 1.0000 1.0000 1.0000 1.0000 1.0000 1.0000 1.0000 1.0000 1.0000 1.0000 1.0000 1.0000 1.0000 1.0000 1.0000 1.0000 1.0000
13 1.0231 1.0234 1.0235 1.0234 1.0230 1.0233 1.0234 1.0234 1.0233 1.0233 - - - - - - - - - -
14 1.0330 1.0332 1.0332 1.0332 1.0331 1.0331 1.0331 1.0333 1.0332 1.0332 - - - - - - - - - -
15 1.0516 1.0518 1.0518 1.0516 1.0518 1.0516 1.0517 1.0518 1.0517 1.0516 - - - - - - - - - -
16 1.0846 1.0858 1.0858 1.0854 1.0852 1.0847 1.0848 1.0846 1.0848 1.0847 0.0295 0.0295 0.0295 0.0295 0.0295 0.0295 0.0295 0.0295 0.0295 0.0295
17 1.1691 1.1691 1.1689 1.1688 1.1688 1.1690 1.1689 1.1692 1.1690 1.1690 - - - - - - - - - -
18 1.2593 1.2594 1.2589 1.2589 1.2589 1.2587 1.2589 1.2589 1.2587 1.2589 0.0342 0.0342 0.0342 0.0342 0.0342 0.0342 0.0342 0.0342 0.0342 0.0342
19 1.4365 1.4364 1.4354 1.4358 1.4356 1.4352 1.4350 1.4353 1.4349 1.4354 0.0390 0.0391 0.0390 0.0390 0.0390 0.0390 0.0390 0.0390 0.0390 0.0390

表3. 20批泽泻药材及配方颗粒HPLC指纹图谱共有峰的相对保留时间

Relative peak area of common peaks in 20 batches of Alisma plantago-aquatica Linn. and its formula granule
共有峰 S1 S2 S3 S4 S5 S6 S7 S8 S9 S10 S11 S12 S13 S1 S15 S16 S17 S18 S19 S20
1 0.0213 0.0175 0.0134 0.0192 0.0286 0.0183 0.0166 0.0371 0.0258 0.0184 0.1580 0.1634 0.1695 0.1403 0.1133 0.1402 0.1473 0.1212 0.1126 0.1764
2 0.0161 0.0107 0.0124 0.0122 0.0103 0.0155 0.0110 0.0519 0.0108 0.0099 0.1064 0.1092 0.1130 0.0936 0.0762 0.0935 0.0983 0.1188 0.1118 0.1209
3 0.0151 0.0116 0.0112 0.0073 0.0115 0.0063 0.0120 0.0141 0.0116 0.0087 0.1756 0.1917 0.1970 0.1624 0.1339 0.1587 0.1722 0.1424 0.1335 0.2055
4 0.0342 0.0221 0.0181 0.0163 0.0169 0.0111 0.0329 0.0594 0.0420 0.0133 0.4767 0.4828 0.4963 0.4188 0.3363 0.4178 0.4388 0.3626 0.3405 0.5242
5 0.0249 0.0228 0.0117 0.0154 0.0124 0.0120 0.0260 0.0562 0.0135 0.0087 0.2004 0.2152 0.2232 0.1839 0.1508 0.1765 0.1929 0.1598 0.1483 0.2269
6 0.0495 0.0333 0.0525 0.0332 0.0238 0.0444 0.0334 0.1484 0.0313 0.0353 0.2265 0.2453 0.2506 0.2048 0.1667 0.1962 0.2166 0.1779 0.1662 0.2622
7 0.0110 0.0223 0.0222 0.0484 0.0149 0.0316 0.0194 0.1328 0.0132 0.0127 0.0976 0.1185 0.1259 0.0977 0.0812 0.0885 0.1057 0.0877 0.0805 0.1272
8 0.0178 0.0271 0.0189 0.0222 0.0080 0.0275 0.0163 0.1628 0.0080 0.0091 0.0833 0.1080 0.1100 0.0898 0.0745 0.0789 0.0939 0.0787 0.0719 0.1118
9 0.0547 0.0460 0.0544 0.0352 0.0182 0.0610 0.0395 0.2634 0.0201 0.0220 0.1954 0.2401 0.2455 0.2010 0.1607 0.1806 0.2092 0.1719 0.1582 0.2503
10 0.0233 0.0099 0.0068 0.0028 0.0015 0.0036 0.0142 0.0256 0.0013 0.0018 - - - - - - - - - -
11 0.0046 0.0032 0.0026 0.0024 0.0080 0.0015 0.0034 0.0231 0.0188 0.0086 - - - - - - - - - -
12 1.0000 1.0000 1.0000 1.0000 1.0000 1.0000 1.0000 1.0000 1.0000 1.0000 1.0000 1.0000 1.0000 1.0000 1.0000 1.0000 1.0000 1.0000 1.0000 1.0000
13 0.0526 0.0284 0.0314 0.0222 0.0232 0.0235 0.0366 0.1004 0.0296 0.0208 - - - - - - - - - -
14 0.0224 0.0233 0.0196 0.0205 0.0287 0.0191 0.0132 0.0515 0.0179 0.0127 - - - - - - - - - -
15 0.0309 0.0105 0.0112 0.0046 0.0093 0.0074 0.0162 0.0234 0.0131 0.0083 - - - - - - - - - -
16 0.0146 0.0093 0.0185 0.0080 0.0086 0.0066 0.0060 0.1789 0.0142 0.0112 0.0867 0.0897 0.0869 0.0771 0.0611 0.0732 0.0822 0.0660 0.0619 0.1006
17 0.1740 0.1263 0.0922 0.0449 0.0202 0.0436 0.1271 0.5067 0.0222 0.0208 - - - - - - - - - -
18 0.3836 0.2572 0.1541 0.0686 0.0126 0.0566 0.2480 2.1285 0.0082 0.0087 0.1039 0.1011 0.1030 0.0832 0.0682 0.0876 0.0888 0.0734 0.0687 0.1094
19 0.2525 0.1494 0.1404 0.1968 0.0966 0.1299 0.1765 1.1875 0.0951 0.0845 0.1013 0.1048 0.1077 0.0874 0.0707 0.0912 0.0923 0.0752 0.0710 0.1139

表4. 20批泽泻药材及配方颗粒HPLC指纹图谱共有峰的相对峰面积

Evaluation of similarity of Alisma plantago-aquatica Linn. and formula granule
泽泻药材 相似度 泽泻配方颗粒 相似度
S1 0.944 S11 0.994
S2 0.979 S12 0.998
S3 0.994 S13 0.997
S4 0.996 S14 1.000
S5 0.997 S15 0.991
S6 0.995 S16 0.997
S7 0.980 S17 1.000
S8 0.500 S18 0.994
S9 0.996 S19 0.990
S10 0.996 S20 0.996

表5. 泽泻药材、泽泻配方颗粒的相似度

Evaluation of similarity of Alisma plantago-aquatica Linn. and formula granule
泽泻药材 相似度 泽泻配方颗粒 相似度
S1 0.865 S11 0.954
S2 0.851 S12 0.950
S3 0.833 S13 0.946
S4 0.851 S14 0.970
S5 0.502 S15 0.988
S6 0.867 S16 0.974
S7 0.862 S17 0.965
S8 0.869 S18 0.983
S9 0.843 S19 0.989
S10 0.862 S20 0.942

表6. 泽泻药材及配方颗粒的相似度

5. 结论

本文建立的泽泻药材指纹图谱,泽泻配方颗粒指纹图谱,其相似度分别在0.500~0.997、0.990~1.000之间,表明药材间和配方颗粒间其化学成分相关性良好;泽泻药材及配方颗粒指纹图谱相似度在0.502~0.989之间,说明泽泻药材到配方颗粒这一系列制备过程中会有一些化学成分含量发生变化。泽泻药材及配方颗粒指纹图谱中有13个共有峰,表明这13个特征成分在泽泻配方颗粒制备全过程中可以进行追溯。通过对泽泻药材、泽泻配方颗粒的HPLC指纹图谱进行相关性研究,阐明了泽泻药材、泽泻配方颗粒、泽泻药材及其配方颗粒在化学成分上的相关性,3者的指纹图谱特征峰变化较大,说明药材经过提取和浓缩等工艺制成配方颗粒后化学成分会有所改变,因此可以将指纹图谱用于中药配方颗粒全过程监控,可以反映生产过程各环节的量质传递变化规律,从而为泽泻的质量控制提供参考依据。

中药配方颗粒是以传统中药饮片为原料,运用现代技术制成的新型配方用药,具有能够满足临床医师按照病人的症状下药,方便使用和携带,并通过对病人症状的轻重缓急确定剂量的优点。泽泻配方颗粒是由泽泻饮片加工制成,且其现在被广泛应用于临床上,但是泽泻的来源复杂,故对泽泻配方颗粒的质量进行控制是有必要的,而中药指纹图谱的整体性、系统性特征为质量评价提供了新的方法。本研究建立了泽泻药材及其配方颗粒的HPLC指纹图谱,该方法稳定,信息量大,重复性好,操作简单且快速,从整体性和模糊性角度评价泽泻药材及其配方颗粒质量的一致性,以期为泽泻及其配方颗粒的质量控制与临床应用提供参考依据。

致谢

本研究得到的贵州省一流课程重点建设项目(项目合同编号:黔教高发[ 2017 ] 158)和2022年度贵州省级“金课”(证书编号:2022JKXX0018)的资助。非常感谢所有在我完成这篇论文过程中提供帮助和支持的人。

文章引用

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