氨氮与纳氏试剂(碘化汞和碘化钾的强碱溶液)反应生成淡红棕色络合物，该络合物在波长420 nm处的吸光度值与水中氨氮浓度成正比 [ 3 ] 。

依据《水质氨氮的测定 纳氏试剂分光光度法》(HJ535-2009)，采用标准曲线校准法进行定量检测。

在8个50 mL比色管中加入一定体积的氨氮标准使用液(5.0 mg/L)，加水至标线；加入1.0 mL酒石酸钾钠(500 g/L)，混匀；加入1.0 mL纳氏试剂，混匀。放置10 min后，在波长420 nm处，用光程20 mm比色皿，以水为参比测量吸光度值。以空白校正的吸光度值为纵坐标，对应的氨氮浓度为横坐标，制作标准曲线。

同时取一定体积待测水样，与标准曲线相同步骤测量吸光度值。水样吸光度值经空白校正后，代入标准曲线计算得到水中氨氮浓度。

能力验证是利用实验室间比对确定实验室校准/检测能力的活动 [ 4 ] ，检测结果外部评估采用稳健统计处理，以室间比分数ZB和室内比分数ZW评判参试实验室检测能力 [ 5 ] 。因ZB代表系统误差、ZW代表随机误差，故检测结果参与外部评估之前，实验室内部需自我评估是否可信。依据实验室内质量控制要求 [ 6 ] ，评估流程应按照检测过程、标准曲线、精密度(异常值取舍)、准确度依次进行(图1)，任一环节不合格均提示数据可疑，即系统误差或随机误差不可接受，应分析并纠正问题后重新检测直至全部环节合格为止。

氨氮标准物质采用水利部水环境监测评价研究中心产品，考核样品由水利部水环境监测评价研究中心同时发放两个不同浓度的未知样品供验证，详见表1。标准样品、考核样品按作业指导书要求取一定体积样品经稀释定容为待测样品。

针对可能影响水中氨氮检测的干扰因素，从以下六项实验条件进行预防性控制。如检测结果实验室内部自我评估不合格，也应从这六项环节分析原因并予以纠正。

图1. 检测结果实验室内部评估流程

表1. 标准物质和考核样品信息一览表

· 人员：由氨氮项目持证人员具体承担此次能力验证活动，同时由实验室质量监督员1~2人对检测人员全程进行陪视，以免出现不符合规定的误操作。

· 器皿：比色管、容量瓶、移液管等计量器具均选用A级产品，事先经计量检定合格，洗净后以5%稀硫酸浸泡过夜，用前取出洗净晾干。

· 用水：将市售蒸馏水事先以离子交换法制备无氨水，经空白测试合格(空白吸光度值A₀< 0.030)准予使用。

· 试剂：按HJ535-2009要求选用相应纯度等级化学试剂，试剂溶液以无氨水为基体现用现配，事先按HJ535-2009规定的样品测定步骤，以无氨水为基体配置空白样品并测定空白吸光度值A₀，A₀< 0.030准予使用。

· 环境：确保实验室理化分析室、分光光度计操作室等操作环境无氨气污染并事先进行连续恒温除湿，确保实验场所温度20~25℃、湿度 £ 55%。

· 仪器：吸光度测量所用紫外可见分光光度计事先经计量检定合格，用前预热30 min后于420 nm波长处进行基线稳定度测试，基线吸光度值波动小于 ± 0.003准予使用。

标准曲线测定结果见表3，标准样品测定结果见表4，考核样品测定结果见表5。

此次水中氨氮检测能力验证考核结果经实验室内部自我评估为可信，数据上报水利部水文局并参与全国水利系统水质监测实验室外部评估。能力验证最终评估结果见表6，ZB和ZW均小于2为满意结果，ZB和ZW在2~3之间为有问题结果，ZB和ZW大于3为不满意结果(离群值)。验证结果表明，表明南通分中心实验室各项检测条件均得到良好控制，系统误差、随机误差均可接受且处于较低水平，检测数据准确度、精密度均有相应的质量控制保障，具备采用纳氏试剂分光光度法进行水中氨氮检测的能力。