Preparation and Application of Fluorescent Microspheres
Fluorescent microspheres have the advantages of highly targeted binding, visualization, and simultaneous detection of multiple substances, and have broad application prospects. The real-time detection (POCT) technology based on fluorescent microspheres has great potential in the field of detection, and has been demonstrated in medicine, biology, environment, and chemistry. This paper comprehensively reviews the preparation methods of fluorescent microspheres and their advancements in interdisciplinary applications.
Fluorescent Microspheres
荧光微球是一类在纳米到微米尺度上含有荧光物质的功能性微球,在外加能量(如光、电等)的激发下能够发射出特定波长的荧光。这类材料具有稳定的物理形态和化学结构、良好的单分散性和均匀的粒径分布,以及高效而稳定的发光效率。荧光微珠具有较大的表面积与体积比,可以轻松有效地固定捕获探针,只需要极少量的样品,实现高灵敏的检测
有机染料型荧光微球是一种特殊的微小颗粒,它们内部或表面负载有能够发出荧光的有机染料。这类微球在受到特定波长的光激发时,可以发射出不同颜色的荧光,广泛应用于生物医学、环境监测、材料科学等领域。使用不同比例的红色和橙色染料对微球进行处理,并使用一种绿色染料对目标分析物进行定量测量
为了将荧光纳米颗粒高效封装到多孔微球中,首先将多孔微球和荧光纳米颗粒分散在能够使其溶胀的有机溶剂中。使用极性不同的溶剂进行交换时,微球会因为溶剂性质的变化而收缩,从而将纳米颗粒固定在其内部空间
纳米颗粒在微球表面的修饰通常采用层层自组装法,形成单层或多层结构
在聚合反应法中,首先需要对纳米颗粒表面进行聚合配体的修饰,使其能够参与后续的聚合反应。这些修饰后的纳米颗粒与微球前体混合,并分散在一个不相溶的连续相中形成乳液液滴。随后,通过自由基引发、光聚合等手段促使液滴内部发生聚合反应
在乳化–溶剂蒸发法中,聚合物前体可以直接与纳米颗粒在含有表面活性剂的连续相中混合。通过搅拌或超声分散处理,形成稳定的乳液液滴。随着溶剂逐渐蒸发,这些液滴固化成内部嵌入了纳米颗粒的微球。尹(Yin)等人的研究显示,通过这种方法制备的荧光亚微米尺寸微球,在水性溶剂中浸泡数月后仍能保持其荧光特性
首先,需要对荧光微球进行表面修饰,以固定捕获探针,从而实现与特定分析物的有效结合。当分析物被微球成功捕获后,使用标记有有机染料、量子点或上转换纳米颗粒等荧光材料的报告探针对其进行定量分析。用于标记微球和报告探针的荧光材料应具有明显不同的光谱特性,以避免光谱重叠,确保检测结果的准确性。
在核酸检测方面,与目标脱氧核糖核酸和核糖核酸互补的序列被用作荧光微球上的探针(
材料 |
测定原理 |
检测技术 |
LOD |
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寡核苷酸 |
UCNPs、量子点编码微球 |
基于杂交的荧光单次和多重检测 |
流式细胞术和共聚焦荧光检测 |
fM-nM |
乙型肝炎病毒基因组 |
量子点编码微球 |
基于杂交的HBV基因组的荧光测 |
流式细胞术光检测 |
-- |
微小RNA (miRNA) |
量子点编码微球 |
基于杂交的荧光单次和多重检测 |
比色检测和共聚焦的荧光检测 |
-- |
DNA序列 |
有机的染料编码微球 |
基于杂交的荧光信号检测 |
荧光检测和智能手机设备 |
fM-pM |
传统上,蛋白质检测主要依赖于酶联免疫吸附测定,但这种方法由于其繁琐且耗时的步骤而受到限制。基于荧光微球的新方法,广泛用于即时检验平台,通过修饰捕获探针来实现高效的蛋白质检测。荧光微球基的蛋白质检测通常基于夹心免疫测定法,其中目标分析物首先被传感探针捕获,然后使用荧光报告分子进行识别。这种能够提供高特异性和灵敏度,适用于多种应用场景(
目标物 |
材料 |
分析机制 |
检测 |
LOD |
免疫球蛋白 |
量子点编码微球 上转换纳米颗粒编码微球 |
基于夹心免疫分析法的荧光单重及多重检测 |
荧光显微镜 流式细胞术的荧光检测 |
纳摩尔水平 |
乙型肝炎病毒抗原 |
QD编码微珠 |
基于夹心免疫分析法的乙型肝炎抗原荧光多重检测 |
流式细胞术的荧光检测 |
250 IU/ml |
甲胎蛋白 |
QD编码微珠 |
基于夹心免疫分析法、使用量子点标记的报告分子的荧光检测 |
共聚焦显微镜的荧光检测 |
0.60 ng/ml |
人血清白蛋白 人C反应蛋白 |
编码微珠的UCNPs |
使用上转换纳米粒子标记的报告分子的夹心免疫分析法 |
使用荧光显微镜的荧光检测 |
7 μg/ml |
急性心肌梗死相关的心脏生物标志物 |
红色荧光微珠 |
侧向流检测试纸条上的免疫层析法 |
荧光分光光度计 |
0.016 ng/ml |
前列腺特异性抗原 |
QD编码的微珠 |
基于夹心免疫分析法的单重及多重检测 |
流式细胞术 荧光显微镜的荧光检测 |
pg-ng/ml range |
循环肿瘤细胞(CTCs)作为转移性癌症的重要生物标志物,在每109个血细胞中可能仅有1~10个CTCs
进一步提高CTCs的捕获效率和纯度,Rao等人开发一种创新方法,使用血小板和白细胞杂合膜包覆的磁珠,通过表面修饰特定抗体形成免疫磁珠
在微生物感染的治疗以及抗菌药物敏感性测试中,及时检测在细菌检测极其重要。传统临床分析方法,例如纸片扩散法、肉汤稀释法和E-test,需要较长的时间才能得出结果
荧光微球在医药领域具有广泛的应用,包括药物传递、疾病诊断、自我检测工具的开发以及药物筛选和基因研究等。通过调节荧光微球的材料组成和结构,可以控制药物的释放速率和位置。例如,Mehmood
荧光微球凭借其独特的光学特性,在药物治疗、疾病诊断、自我检测、药物筛选及基因研究等多个方面提供了新的可能,展示了其在生物医药领域的广阔前景。
荧光微球在环境监测领域也展现出巨大的应用潜力。在水质监测中,荧光微球可以作为灵敏的传感器用于检测重金属离子、有机污染物和病原微生物等。通过表面修饰特定的识别分子,如螯合剂、抗体或核酸适配体,荧光微球可以实现对目标污染物的高选择性检测。荧光微球能够与特定污染物结合,并通过荧光信号实现对这些污染物的高效检测。例如,Gui
荧光微球凭借其独特的光学特性,在环境污染物的快速检测、多重分析以及有效去除等方面展现了巨大的潜力,为环境保护提供了强有力的技术支持。
在材料科学领域,荧光微球被广泛应用于功能材料的制备和光学器件与显示技术中。作为功能材料的构建单元,荧光微球可以用于制备光子晶体、智能涂料和防伪材料等。通过调控荧光微球的尺寸、形状和排列方式,可以制备出具有特定光学性能的功能材料。例如,基于荧光微球的光子晶体可以用于制备高反射率涂层和光学滤波器。在光学器件和显示技术方面,荧光微球被用于制备高亮度、低功耗的显示器件。通过将不同颜色的荧光微球集成到显示面板中,可以实现全彩色显示。此外,荧光微球还被用于制备光学传感器、激光器和光波导等器件。例如,基于上转换荧光微球的光学传感器可以实现对近红外光的高灵敏度检测,在生物成像和光通信领域具有重要应用。
荧光微球作为一种多功能纳米材料,在生物医学、环境监测和材料科学等领域展现出广阔的应用前景。随着制备技术的不断进步,荧光微球的尺寸均一性、结构复杂性和功能多样性将得到进一步提升。未来,荧光微球的研究将更加注重多功能集成、智能化响应和生物安全性等方面。例如,开发具有环境响应性的智能荧光微球,可以实现对生物体内微环境的实时监测和精准调控。此外,将荧光微球与其他纳米材料(如磁性纳米颗粒、金纳米棒等)结合,可以构建多功能纳米平台,用于多模态成像和协同治疗。在环境监测领域,荧光微球将朝着更高灵敏度、更高选择性和更便携化的方向发展。通过与物联网技术结合,荧光微球传感器有望实现环境污染物的实时、在线监测和远程数据传输。在材料科学领域,荧光微球将在新型光学材料、能源材料和智能材料等方面发挥更大作用,为开发高性能、多功能材料提供新的思路和方法。总的来说,荧光微球作为一种重要的功能材料,其研究和应用将继续深入,为生物医学、环境科学和材料科学等领域的发展提供强有力的技术支持。随着跨学科合作的不断加强,荧光微球必将在更多领域展现出其独特的优势和广阔的应用前景。
2023年度湖南省自然科学基金项目(2023JJ60207, 2024JJ9053, 2025JJ803736);湖南环境生物职业技术学院青年基金项目(QN2023-03);湖南省教育厅科学研究项目(24C0863)。
*第一作者。
#通讯作者。