GC-MS Spectrometry for Detection of Amide Alcohol and Veterinary Drug Residues in Fish Meat
A gas chromatography-mass spectrometry was established for the simultaneous detection of chloramphenicol (CAP), florfenicol (FF), florfenicol (FAH), and thiamethoxam (TAP) veterinary drug residues in fish meat. By optimizing the gas chromatography conditions to achieve good separation conditions, collision optimization was performed on the primary ion fragments of chloramphenicol, florfenicol, florfenicoline, and trimethylsilyl derivatives of methicillin to obtain corresponding ion pairs as the basis for qualitative and quantitative analysis. Using 2% ammoniated ethyl acetate for extraction and MCX solid-phase column purification, 100 µL of BSTFA + TMCS (99 + 1) silane reagent was added and reacted at 65°C for 30 minutes. The qualitative and quantitative analysis was performed by GC-MS/MS with an EI source, using multiple reaction monitoring (MRM) for ion selection. The correlation coefficient was greater than 0.99, with a linear range of 1 to 1000 µg/L. The recovery rate of spiked grass carp minced meat samples was between 86.2% and 94.4%, with a relative standard deviation of less than 5%. The detection limit was 0.1 µg/kg.
GC-MS Spectrometry
酰胺醇类又称氯霉素类抗生素，包括氯霉素、甲砜霉素、氟苯尼考和氟苯尼考胺。这类抗生素以其独特的抗菌机制和广谱的抗菌活性，成为治疗多种细菌感染性疾病的首选药物。然而，随着抗生素的广泛使用，细菌耐药性问题日益严重，该类抗生素不仅水溶性差，其毒性、耐药性也逐渐被发现。氯霉素可致人再生障碍性贫血，鉴于此，欧盟、美国等地已禁止在动物性食品中使用氯霉素(CAP)
酰氨醇类药物的测定方法主要有微生物测定法、免疫分析法(Immuno Assay, IA)、高效液相色谱法(High performance Liquid Chromatography, HPLC)、气相色谱法(Gas Chromatography, GC)、液相色谱串联质谱法(Liquid chromatography tandem HPLC-MS/MS)、气相色谱串联质谱法(Gas Chromatography-Mass Spectrometry, GC-MS/MS)。因GC-MS/MS的高分辨率、高分离度、抗干扰能力强等优点而被广泛应用在化学、生物和环境分析中。本文旨在研究利用气相色谱–质谱联用技术对酰胺醇类抗生素进行检测，做好酰胺醇类残留量的安全监控监管，为食品安全保驾护航。
GCMS-TQ8040NX三重四极杆气质联用仪(岛津)；TX223千分之一天平(岛津)；Fotector plus高通量全自动固相萃取仪(睿科)；MPE高通量真空平行浓缩仪(睿科)；Auto EVA 80高通量全自动平行浓缩仪(睿科)；Auto EVA mini全自动平行浓缩仪(睿科)；涡旋振荡器(IKA)；速冻离心机(SIGMA)；垂直振荡器V12 (睿科)；烘箱(安普)；沃特世的MXC固相萃取小柱(600 mg/3 mL)；氯霉素、氟苯尼考胺、氟苯尼考及甲砜霉素标准物质纯度 ≥ 98% (阿尔塔)；BSTFA + TMCS (99 + 1)硅烷化试剂；乙腈、乙酸乙酯、甲醇、正己烷，均为色谱纯，天津大茂化学试剂厂。
称取鱼肉糜5 g加20 mL 2%的氨水乙酸乙酯于50 mL离心管中，置于垂直振荡器中，500 r/min振荡10 min，在5℃下，5000 r/min离心5 min，取上清液于玻璃离心管中，重新提取一下残渣，合并上清液，置于平行浓缩仪中，40℃水浴浓缩近干，氮气吹干，加入3 mL 5%乙酸水溶液涡旋30 s复溶，3 mL甲醇、3 mL 5%乙酸水预淋洗MXC固相萃取小柱，上样，用2 mL 5%乙酸水溶液淋洗，弃去淋洗液，用6 mL 2%氨水甲醇溶液洗脱，收集洗脱液，50℃氮吹至近干，氮气吹干，依次用100 uL乙腈复溶，移至2 mL样品瓶中，再用100 uL清洗并合并，加入衍生试剂100 uL，混匀，置于烘箱中，65℃反应30 min，取出冷却至室温，50℃氮吹干，加1 mL正己烷复溶，待测。
色谱条件：DB-5MS (30 m × 0.25 mm i. d. × 0.25 um)毛细管柱，载气为高纯氦气，进样口温度230℃，进样模式：不分流，柱流量1.00 mL/min，高压进样，柱温：80℃保持1 min，以30℃/min升至280℃保持10 min。
质谱条件：离子源为EI源，离子源温度230℃，接口温度250℃，检测器电压：调谐电压+ 0.6 KV，电子能量70 eV，灯丝发射电流185 uA，采集方式：MRM。
配制标准系列，按实验步骤处理上机测试得到曲线相关系数和仪器检出限。氟苯尼考胺的线性方程y = 2323.5x − 277.28，相关系数R 0.996，氯霉素的线性方程y = 11444.1x − 85488.7，相关系数R为0.996，氟苯尼考的线性方程y = 6477.9x − 62835.8相关系数R为0.995，甲砜霉素的线性方程y = 6477.9x − 30524.8，相关系数R为0.999，仪器检出限均为0.1 ug/L。
取浓度为5 ug/L的标准溶液，按步骤处理上机测试，考察仪器重复性，各组分峰面积及RSD%见
NO.化合物名称 |
峰面积 |
RSD% |
|||||
1 |
2 |
3 |
4 |
5 |
6 |
7 |
|
1.氟苯尼考胺 |
7861 |
7653 |
7734 |
7854 |
7720 |
7792 |
1.05 |
2.氯霉素 |
29313 |
29163 |
29463 |
29261 |
29243 |
29346 |
0.35 |
3.氟苯尼考 |
30838 |
30461 |
31061 |
31072 |
30912 |
31046 |
0.76 |
4.甲砜霉素 |
10643 |
10723 |
10812 |
10764 |
10905 |
10687 |
0.87 |
取草鱼肉糜样品，按上述方法进行检测，样品中未检测酰胺醇类药物，以此样品为基质，添加浓度为5 ug/kg，平行处理6份，样品加标测定结果及加标回收率结果见
NO.化合物名称 |
加标样品测定浓度(ug/kg) |
|||||||
1 |
2 |
3 |
4 |
5 |
6 |
平均回收率% |
RSD% |
|
1氟苯尼考胺 |
4.25 |
4.62 |
4.24 |
4.35 |
4.16 |
4.22 |
86.2 |
3.84 |
2氯霉素 |
4.72 |
4.76 |
4.68 |
4.72 |
4.68 |
4.76 |
94.4 |
4.03 |
3氟苯尼考 |
4.42 |
4.35 |
4.46 |
4.51 |
4.47 |
4.37 |
88.6 |
3.56 |
4甲砜霉素 |
4.29 |
4.31 |
4.41 |
4.38 |
4.52 |
4.28 |
87.3 |
2.10 |
本文利用岛津三重四极杆气质联用仪，建立了鱼肉中氯霉素(CAP)、氟苯尼考(FF)、氟苯尼考胺(FAH)及甲砜霉素(TAP)的残留量的气相色谱串联质谱检测方法，该方法在1~1000 ug/L浓度范围内，各组分线性良好，相关系数均 > 0.99。草鱼肉糜试样中加标回收率在86.2%~94.4%之间，准确度较高，相对标准偏差小于5%，重复性较好。检出限为0.1 ug/kg，灵敏度较高，使用MRM模式进行采集定量抗干扰能力更强，利用保留时间和离子比率进行双重定性准确可靠。该方法简单快速、灵敏度高、精密度好，可以满足酰胺醇类及其代谢物残留检测的需求。